Evaluación de ovocitos de vaca para maduración en cultivo

Abstract

Este trabajo estudió la maduración in vitro de ovocitos bovinos en relación a sus características morfológicas, previamente establecidas en un patrón no invasivo de clasificación. Se aspiraron folículos de 2 - 6 mm de ovarios de vacas de matadero. Los ovocitos se clasificaron en 6 categorías de acuerdo a las características citoplasmáticas y de las cubiertas ovocitarias mediante un microscopio estereoscópico: 1, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y rodeado en su totalidad por una masa compacta de células del cúmulo; 2, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y rodeado en forma parcial por células del cúmulo; 3, ovocitos con citoplasma con granulado homogéneo y desprovisto de células del cúmulo; 4, ovocitos con citoplasma polarizado y rodeado en su totalidad por células del cúmulo; 5, ovocitos con citoplasma pola­rizado y rodeado en forma parcial por células del cúmulo; 6, ovocitos con citoplasma pola­rizado y desprovisto de células del cúmulo. Cada categoría se incubó en forma separada depositando 10 ovocitos por gota de 50 tl de medio TCM-199, suplementado por 24 horas a 39°C en aire con 5% de CO7. La maduración de los ovocitos se evaluó con el microscopio de contraste de fases, observándose los estados de maduración nuclear: vesícula germinativa, desaparición de la envoltura nuclear, formación de placas metafásicas I y II y degeneración ovocitaria. Se estudió un total de 1206 ovocitos. Las categorías ovocitarias 1 y 2 fueron las que obtuvieron las mayores tasa de maduración in vitro, 75,3% y 68,6% respectivamente (p< 0,05). Las categorías 4 y 5 obtuvieron tasas de maduración de 55,5% y 47,2% respectivamente, no difiriendo entre ellas. Las categorías que obtuvieron las menores tasas de maduración en cultivo fueron la 3 y 6, con 34,95% y 30,97% respectivamente (p< 0,05), sin diferencias entre ambas. La viabilidad celular evaluada por FDA antes y después del cultivo fue de 80,7 y 77,15% respectivamente. Se concluye que la selección de los ovocitos previo a su cultivo, mediante técnicas no invasivas, incrementaría la tasa de maduración in vitro. En este sentido, un ovoplasma homogéneo y la presencia de varias capas compactas de células del cúmulo alrededor del ovocito, fueron las características morfo­lógicas que más influyeron en la maduración ovocitaria.