Desarrollo y validación de un método de cromatografía líquida acoplado a detección por arreglo de diodos para la cuantificación de residuos de nicarbazina

Abstract

La Nicarbazina es un coccidiostato sintético utilizado en medicina veterinaria para el control protozoario (Eimeria sp) en pollos. Si no se respetan las dosis de aplicación y periodos de resguardo de estos fármacos, pueden quedar en forma de residuos en los tejidos destinados al consumo humano, los que pueden ocasionar efectos nocivos en la salud. Con el propósito de entregar productos sanos, se han establecido Límites Máximos Residuales (LMR), por lo que es importante contar con metodologías de análisis validadas para determinar dichos límites. Con este objetivo, en esta memoria se desarrolló un método simple y confiable para la detección de residuos de nicarbazina a través de cromatografía líquida de alta eficiencia acoplado a detector de arreglo de diodos, que cumpla con los criterios de validación establecidos en la Comunidad Europea (2002/657/CE). Durante el desarrollo del método, el tipo y volumen de extractante, la forma de limpieza de la muestra y la composición de la fase móvil fue modificada hasta optimizarla. Finalmente el método validado consistió en 2 g de músculo de pollo que fueron fortificados y extraído el analito con 12 ml de acetonitrilo asistido con energía de ultrasonido, limpiada a través del uso de filtro y evaporado a sequedad bajo corriente de nitrógeno. Los extractos fueron reconstituidos en 500 μl de acetonitrilo/agua 1/1, para luego realizar el análisis instrumental en HPLC-DAD a 350 nm. El método fue validado según las directrices de la comunidad europea y el tejido de músculo de pollo fue fortificado a niveles de 100, 200 y 300 μg/Kg con el estándar de nicarbazina. El límite de decisión (CCα) fue de 205 μg/kg y la capacidad detección (CCβ) fue de 211 μg/kg. La recuperación fue mayor al 80% y el límite de detección fue de 10 μg/kg (basado en la curva matriz). Finalmente el método validado fue aplicado a un programa piloto de detección de residuos de medicamentos de uso veterinario en alimentos de origen animal, tal piloto fue desarrollado en conjunto entre el Instituto de Salud Pública (ISP) y el Ministerio de Salud (MINSAL).