Detección de Brachyspira spp. en Cerdos de crianza - engorda en Chile

Abstract

La espiroquetosis intestinal porcina cuyo agente etiológico es Brachyspira pilosicoli y la disentería porcina producida por B. hyodysenteriae, son las enfermedades sub-clínicas y que afectan la eficiencia de conversión alimentaria, que representan un desafío productivo y de las cuales existe sospecha clínica y patológica en el país. En este trabajo se implementó la detección de Brachyspira spp. en cerdos en etapa de crecimiento-engorda a partir de muestras de heces. Se incluyeron 9 planteles distribuidos en cuatro regiones administrativas del país, donde se sospechaba de su presencia, debido a episodios de diarrea y baja ganancia diaria de peso. Se muestrearon 170 cerdos de entre 100 y 150 días, que no habían sido tratados con antibióticos desde 20 días previos al muestreo. Las muestras fueron tomadas desde heces frescas o desde el recto mediante tórulas con medio de transporte Cary-Blair (COPAN, Murrieta, CA, USA) y mantenidas en refrigeración hasta su procesamiento en el laboratorio antes de 48 horas de colectadas. Las tórulas fueron sembradas en placas Petri con medio tripticasa soya (ATS) (Bacton, Dickinson & Co., Le Pont de Claix,France) con 5% de sangre ovina estéril y con la adición de espectinomicina 200 mg/L, vancomicina 50 mg/L, rifampicina 12.5 mg/L y colistina 12.5 mg/L. Las placas previamente reducidas fueron incubadas en anaerobiosis (Gaspak®, BBL, Division of ioQuest Cockeysville, Maryland. Div. Becton, Dickinson & Co) por 5 a 7 días a 37ºC. Se obtuvieron 56 (32,9%) cultivos sospechosos con desarrollo bacteriano en película y presencia de hemólisis en 8 (88,9%) planteles. Estas muestras fueron sometidos a ensayo de D-PCR para la detección del gen 16S rDNA de B. pilosicoli y gen NADH oxidasa de B. hyodysenteriae, utilizando los partidores P1 (AGAGGAAAGTTTTTTCGCTTC) y P2 (GCACCTATGTTAAACGTCCTTG) y, H1 (ACTAAAGATCCTGATGTATTTG) y H2 (CTAATAAACGTCTGCTGC) respectivamente, obteniendo nueve muestras que presentaron bandas de peso molecular cercano al buscado para B. pilosicoli, una resultó con bandas de peso molecular cercano al buscado para B. hyodysenteriae , y una presentó bandas de ambos pesos moleculares buscados. Todos los cultivos sospechosos a D-PCR fueron resembrados, pero sólo fue posible obtener cultivos puros de 4 de ellos, los que fueron sometidos a pruebas de caracterización bioquímica. Esta caracterización bioquímica, resultó acorde a los resultados esperados para B. pilosicoli. Para confirmar este hallazgo, un producto de 823 bp del gen 16S rDNA de B. pilosicoli fue purificado y secuenciado (Genbank N° JX486100), demostrando una identidad completa con otras secuencias publicadas del mismo gen (Genbank N° JF430717 Suecia, HM450982 Tailandia, CP002025 Australia, NR025674 Francia, AB120008 Japón). Estos resultados confirman, por primera vez, la presencia de Brachyspira pilosicoli en Chile