Implementación de un nuevo protocolo de PCR para la detección de Brucella canis

Abstract

La Brucelosis canina (BC) es una enfermedad infectocontagiosa zoonótica causada principalmente por la bacteria Brucella canis (B. canis). Sin embargo, se han descrito infecciones esporádicas causadas tanto por Brucella suis (B. suis) y Brucella abortus (B. abortus) como también por Brucella melitensis (B. melitensis), las cuales producen en el animal un cuadro autolimitado. La infección se caracteriza por producir infertilidad tanto en machos como en hembras, afectando la vida reproductiva del animal, lo que conlleva importantes pérdidas económicas en criaderos de perros y pérdida afectiva para propietarios cuando el animal debe ser eutanasiado. El diagnóstico suele realizarse mediante pruebas serológicas, las cuales presentan como principal desventaja la obtención de resultados falsos positivos por reactividad cruzada con otras bacterias, ya sea del mismo o distinto género, o bien resultados falsos negativos en casos crónicos de infección y por esta razón se requiere de la confirmación diagnóstica mediante el aislamiento bacteriano como método diagnóstico directo. Sin embargo, lo anterior conlleva tanto el riesgo de infección al personal de laboratorio que trabaja con esta bacteria debido a su carácter zoonótico y por otra parte involucra mayor tiempo debido a que este método requiere de un periodo prolongado de incubación. En consideración a lo anterior, esta memoria de título tuvo por objeto desarrollar un PCR convencional capaz de diferenciar entre la detección de B. canis, B. suis y B. abortus, mediante el diseño in silico de un par de partidores que generaron un amplicón de mayor tamaño para la especie de interés en relación a las otras dos especies de Brucella. El análisis de las secuencias nucleotídicas obtenidas mediante los programas de libre acceso Clustal W y BLAST permitió establecer la identidad nucleotídica de los fragmentos obtenidos, corroborando así la detección diferencial entre B. canis, B. suis y B. abortus. Así, este método constituye una prometedora alternativa al aislamiento bacteriano como método diagnóstico directo y complementario a pruebas serológicas.