Estudio de la maduración in vitro de ovocitos caninos provenientes de folículos ováricos en diferentes estados del desarrollo a través del ciclo estral

Abstract

La tasa de maduración in vitro de ovocitos (IVM) caninos ha sido tradicionalmente baja. En el presente estudio se propuso evaluar la IVM de ovocitos caninos considerando el desarrollo folicular desde donde provenían los ovocitos y las etapas del ciclo estral. Los ovocitos se obtuvieron de ovarios de perras ovariohisterectomizadas. Mediante las estructuras ováricas y progesterona plasmática se identificaron los estados del ciclo (Anestro, Proestro/Estro y Diestro) y el desarrollo folicular: preantral, antral chico, antral mediano y antral grande. De cada tamaño folicular se recolectaron ovocitos que se incubaron para maduración por 72 h en medio TCM-199 suplementado. El estado nuclear fue clasificado en vesícula germinal (VG), reinicio meiótico (GVBD) y metafase I y II (MI-MII). Los resultados se analizaron por ANOVA evaluando el estado nuclear de acuerdo al desarrollo folicular y ciclo reproductivo. El desarrollo folicular y estado reproductivo influyeron (P <0.05) en el desarrollo meiótico. Los mayores porcentajes de ovocitos en MI-MII correspondieron a perras en Proestro/Estro y Diestro (P <0.05) y de folículos antrales (P < 0.05). En Anestro, se obtuvo el mayor porcentaje de ovocitos en VG (P<0.05), correspondiendo a ovocitos (P <0.05) de folículos preantrales. La etapa del ciclo estral influenció el desarrollo meiótico independiente del tamaño folicular, siendo Proestro/Estro y Diestro las etapas con mayores tasas de MI-MII. Independiente de la etapa del ciclo, los tamaños foliculares con mayor desarrollo meiótico fueron los ovocitos de folículos antrales, principalmente medianos y grandes, indicando que la procedencia de los ovocitos influye en la capacidad de maduración in vitro.

Canine in vitro maturation rate (IVM) has been traditionally low. In the present study evaluated the IVM of canine oocytes, considering the stage of the follicular development and the phases of the estrous cycles. The oocytes were collected from ovaries from ovariohysterectomized bitches according sizes of developing follicles throughout the estrus cycle. The phases of the estrous cycle (anestrus, proestrous/estrus and diestrus) were assessed by evaluating the presence or absence of follicles and corpus luteum on the ovarian surface and by progesterone analysis. The oocytes were incubated for IVM for 72 h in a supplemented TCM-199. The nuclear development was classified in germinal vesicle (GV), meiotic resumption (GVBD) and metaphase I and II (MI-MII). The results were analyzed by ANOVA. The follicular development and reproductive phase influenced the oocyte meiotic development (P<0.05). The highest rates of oocytes in MI-MII were mostly from dogs in Proestrus/Estrus and Diestrus (P<0.05), in antral stage. In Anestrus, the mayor percentage (P<0.05) of oocytes remained at GV, being mainly at preantral follicles stage (P<0.05). The reproductive phases influenced the meiotic development regardless the follicular size. The oocytes from bitches at proestrus/estrus and diestrus phases showed the highest rates of MI-MII. Independently the reproductive phases, the highest advance in meiotic development were observed in oocytes from antral follicles, mostly medium and large, indicating that the source of oocytes influences the ability of in vitro maturation.