Obtención, cultivo y diferenciación de células madre provenientes de tejido adiposo y gelatina de Wharton para uso en terapia celular en casos de insuficiencia ovárica prematura

Abstract

La insuficiencia ovárica prematura es una condición en donde los ovarios dejan de funcionar normalmente antes de los 40 años, la cual genera problemas asociados a la reducción de estrógenos y progesterona. Los tratamientos actuales no se centran en la reversión de la condición, más bien en atacar las consecuencias de ésta. Se propone el uso de terapia celular como tratamiento para la condición mencionada, la cual consiste en la inyección intraovárica de células madre para sustituir la función de células cuya función se encuentra dañada. Así, un buen candidato para la terapia celular, son las células mesenquimales aisladas de la gelatina de Wharton (Wharton s Jelly-MesenchymalStem Cells, WJ-MSCs), dado que este tipo de células tiene un alto potencial diferenciativo, baja antigenicidad, y dado que provienen de cordón umbilical, son de fácil recolección. El objetivo del proyecto es el desarrollo de protocolos para optimizar la expansión y producción de un banco de células madre mesenquimales de la gelatina de Wharton. Para esto se extraen células madre de la gelatina de Wharton utilizando una metodología de explantes. Estas células son utilizadas para verificar la factibilidad de su crecimiento en suspensión utilizando microcarriers Cytodex®1 en un Spinner Flask. Estas células en el cultivo realizado presentan, para su fase de crecimiento exponencial, una tasa de crecimiento máxima μmax= 0,02. 1[h−1] y un tiempo de duplicación td=32,86[h]. Se calcula igualmente para el cultivo los moles de lactato producidos por mol de glucosa consumidos, conocido como rendimiento glucosa/lactato. Para la fase de crecimiento exponencial del cultivo se obtiene un rendimiento de 2,39, lo cual indica que las células utilizan la fermentación láctica como principal método para producir energía. Se compara el comportamiento de estas células con el comportamiento de células madre provenientes de tejido adiposo (ADCs) cultivadas en placas y en suspensión. Para el cultivo de WJ-MSCs en microcarriers se obtienen tiempos de duplicación 1,2 veces mayor que para el cultivo de ADCs en placas, mostrando que el cultivo eficiente de WJ-MSCs en microcarriers es posible. Por otra parte, se estudia el potencial de adherencia y diferenciación para las células provenientes del cultivo en suspensión. Se comprueba que mantienen la capacidad de adherencia, y se obtienen resultados positivos para la diferenciación condrogénica y osteogénica, pero negativos para la adipogénica.