Implementación de la reacción en cadena de la polimerasa para la detección del virus de la panleucopenia felina

Abstract

La Panleucopenia Felina es una enfermedad que se caracteriza por una reducción del número de leucocitos circulantes y enteritis con degeneración de las vellosidades intestinales. El agente etiológico de la enfermedad es el Virus de la Panleucopenia Felina (VPF), perteneciente a la familia Parvoviridae, es altamente contagioso y presenta una alta mortalidad y morbilidad, siendo el gato doméstico el principal afectado. Si bien la vacunación de gatos sanos es la forma más efectiva de prevenir la enfermedad, una vez que se presenta el cuadro clínico, el tratamiento es de soporte, presentando una alta mortalidad durante los primeros días de la enfermedad. Los gatos positivos al VPF deben ser hospitalizados y aislados al menos 2 semanas para evitar la transmisión viral. La detección temprana suele hacerse mediante la prueba basada en el ensayo por inmunoadsorción ligado a enzimas (ELISA), el que detecta antígenos virales en muestras de heces. Como un método diagnóstico complementario, en esta Memoria de Título se planteó implementar la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) orientado al diagnóstico del VPF, usando inicialmente muestras positivas procedentes de dos vacunas felinas y una vacuna canina; y como una aproximación a muestras reales, se realizó una mezcla de estas vacunas comerciales con heces y sangre de un gato sano. Los resultados al realizar PCR utilizando un par de partidores In silico diseñados en base a secuencias del gen VP2 del VPF disponibles en GenBank®, mostraron una visualización nítida de los controles positivos, y ninguna amplificación inespecífica o visualización de controles negativos. Al analizar uno de los fragmentos obtenidos, este posee un porcentaje de identidad nucleotídica mayor al 97% respecto de la información disponible en GenBank®, corroborando la detección de un fragmento del VP2. Así, estos resultados sugieren la opción futura de aplicar el mismo protocolo de manera diagnóstica, utilizando muestras obtenidas de pacientes sospechosos a estar infectados con VPF

Feline Panleukopenia is a disease characterized by a reduction in the number of circulating leukocytes and enteritis with degeneration of the intestinal villi. The etiologic agent of the disease is Feline Panleukopenia Virus (FPV), belonging to the Parvoviridae family, is highly contagious and has high mortality and morbility, the domestic cat being the main affected. Although vaccination of healthy cats is the most effective way to prevent the disease, once the symptoms appear, the treatment is supportive, presenting high mortality in the first days of the disease. FPV positive cats should be hospitalized and isolated for at least 2 weeks to avoid viral transmission. Early detection is usually done by the enzyme-linked inmunoadsorption assay (ELISA), which detects viral antigens in stool samples. As a complementary diagnostic method, in this Title Memory it was proposed to implement the Polymerase Chain Reaction (PCR) aimed at the diagnosis of FPV, initially in positive samples from two feline vaccines and one canine vaccine. As an approximatino to real samples, the comercial vaccines were mixed with feces and blood from a healthy cat. The results of perform PCR using In silico designed primers based on the VP2 gene sequences of FPV avalaible in GenBank®, showed a sharp visualization of positive controls, and no nonspecific amplification or negative controls visualization. When analyzing one of the obtained fragments, it has a nucleotide identity percentage greater tan 97% with respect to the information avalaible in GenBank®, corroborating the detection of a VP2 fragment. Thus, the future option of applying the same protocol in a diagnostic way is opened, using samples obtained from patients with FPV suspected infection