Diseño de la estandarización química y evaluación de la actividad analgésica tópica de un extracto activo de Buddleja globosa hope, Buddlejaceae, matico

Abstract

Existen diversos antecedentes de las propiedades farmacológicas de B. globosa (matico) tanto de su actividad analgésica como antiinflamatoria en trabajos anteriores realizados en nuestro laboratorio, como también en publicaciones científicas, esto condujo a continuar con el estudio farmacológico y químico, de esta especie. El principal objetivo de nuestro trabajo fue la comparación de la eficacia del extracto metanólico de hojas de matico (EMAT-1) y etanólicos (ETMAT-1), con respecto a la época de recolección de las hojas, estaciones de verano y otoño. Los extractos fueron fraccionados con solventes de polaridad creciente. El seguimiento cromatográfico se realizó mediante cromatografía de capa fina en gel de sílice, usando diferentes sistemas de desarrollo y reveladores. La identificación de los compuestos se realizó por medio del estudio espectroscópico de IR y de RMN de 1 H y 13 C, cuando fue necesario. Además, cuando se dispuso del estándar se identifico la presencia de estos en las fracciones del extracto (EMAT-1), por cromatografía liquida de alta resolución (HPLC). Se realizó una valoración espectrofotométrica para los compuestos fenólicos, presentes en los extractos, mediante la adaptación del método de Glories y la validación posterior del método establecido. Se evaluó las diferencias en el contenido de flavonoides y feniletanoides. El estudio farmacológico consistió en la evaluación de la actividad analgésica en ratones tanto vía oral como tópica; en la analgesia vía oral se utilizó el método de las contorsiones abdominales, el método de la formalina y el método del tail flick, por vía tópica se utilizo el tail flick. En cuanto a los estudios de actividad antiinflamatoria por vía tópica se utilizó el método de la inducción de edema en la oreja del ratón provocada por acetato de tetradecanoilforbol (TPA). En cuanto a las propiedades farmacológicas, se evaluaron cuatro extractos de matico EMAT-1(verano), ETMAT-1(otoño), ETMAT-1(verano) y EMG(verano), apreciándose una diferencia significativa en los extractos recolectados en las diferentes épocas del año, siendo el matico recolectado en el verano más eficaz, respecto a las propiedades tanto analgésicas como antiinflamatorias, evaluadas. Además, se evaluó la actividad antioxidante mediante el método de la xantino oxidasa y la actividad atrapadora de radicales libres por el método del radical 2,2-difenil-1-picril hidrazilo (DPPH) de el extracto ETMAT-1(otoño) el cual no había sido evaluado en estudios anteriores. También se realizaron, estudios microbiológicos in vitro para ver si los extractos eran antibacterianos y/o antifúngicos, mediante el ensayo de bioautografía, con este objetivo los extractos ETMAT-1(otoño) y EMAT-1 (verano), fueron sembrados en cromatolaminas de aluminio recubiertas con gel de sílice 60 (Merck) determinándose la fase móvil más apropiada para cada uno de ellos. Se prepararon caldos de cultivo de las diferentes cepas, utilizando como medio líquido de cultivo TSB (Triptona soy Broth) para bacterias y PDB (potatoes dextrose broth) para hongos. Los resultado de esta investigación permitieron demostrar la variación estacional de los principios activos, pudiendose afirmar que la mejor época de recolección es el verano. Se identificaron tres flavonoles (quercetina, apigenina, 7-O-glucósido de luteolina) y un feniletanoide derivado del ácido cafeico: verbascosido, los que serian en parte responsables de las propiedades atribuidas a esta especie. De los resultados de los ensayos farmacológicos se puede deducir que todos los extractos utilizados tienen propiedades tanto analgésicas como antiinflamatorias, siendo la actividad analgésica mayor que la antiinflamatoria, los extractos de las hojas recolectadas en verano fueron más efectivos que el de otoño, destacándose por sobre los demás el extracto ETMAT-1(verano). Los resultados microbiológicos mostraron la inactividad de los extractos ensayados EMAT(verano) y ETMAT-1(otoño). Respecto a la actividad antioxidante, la capacidad inhibitoria de xantino oxidasa resultó nula, no así la capacidad atrapadora de radicales libres en el ensayo de DPPH, actividad que puede deberse a la presencia de los flavonoles.

Different antecedents of the pharmacology proprieties of Buddleja globosa (matico), respect analgesic and antiinflamation activity in previous experiments made in our laboratory, and also, in cientifics publication, and this carried to continue with the pharmacology and chemistry study, of this species. The principal objective of our experiment it was the comparison of extract fractioned of the species. The experiments was with methanolic extract of matico (ETMAT-1), also to made the comparison of leaves take in different seasons of the year for see some difference in the efficacy of the extract. The gathering matico it was in the autumn and summer. The was fractioned with solvent of increasing polarity. In the experiments we used thin layer chromatography in silica gel, we use different development. The identification of compounds it was across spectroscopy of IR and RMN of 1H y 13C for some compounds, also HPLC for compounds with standard. The assay was across espectrophotometric method for the compounds on the extracts, when was necessary we adapted the Glories method and validate. It was evaluated the difference between contented of flavonoles and feniletanoides. The pharmacology studio evaluated the analgesic activity in oral and topic via, on the analgesic in oral via oral we used the abdominal contortions method, formalin method and tail flick method, in mousse, for via we used the tail flick method. In the activity antiinflammatory for topic via we used the edema induction method on the mouse ear provoked for tetradecanoilforbol-acetate (TPA) . In was evaluated 4 extracts of matico in experiments EMAT-1 (methanolic summer extract), ETMAT-1(ethanolic autumn extract), ETMAT-1 (ethanolic summer extract) and EMG (global methanolic extract of summer), it was saw a difference on the extracts gathering analgesic and antiinflamatory proprieties. Also it was evaluated the antixidant activity for xantino oxidasa method and the capture free radical activity across 2,2-difenil-1-picril hidrazil (DPPH) method of the extract ETMAT-1(autumn), this don’t was evaluated in studies preius. It was made also microbiologic experiments in vitro for see if the extracts was antimicrobian and/o antifungy bioautografy essay, the EMAT-1(summer) and ETMAT-1(autumn) extracts, it was cultivate in silica gel 60 (Merck) and t was established of movil fase more suitable for each. It was made cultivate medium for bacterium and PDB (potatoes dextrose broth) for fungi. How chemistry result we can say that the variation of material raw depends of the season of the year that it was collect, and the best season is the summer, also the identification of 3 flavonoles ( quercetina, apigenina, 7-O-glcoside de luteolina) and other fenolic compounds, the cafeic acid (verbascoside), it was the responsible of the proprieties of this specie. The pharmacology experiments we can say that all extract used have analgesic and antiinflamatory than, and the summer extract most effective than autumn, the ETMAT-1 (summer) is the most important. The microbiologic and antioxidant result of the extracts studies it was kind of null, it doesn’t showed activity in these areas.