Apoptosis en tumor venéreo transmisible canino, durante fase progresiva y regresiva

Abstract

La apoptosis o muerte celular programada es la eliminación de células que ya no son necesarias o que están dañadas genéticamente. Es controlada por una variedad de genes, muchos de los cuales presentan mutación y/o disfuncionalidad en su regulación, asociada a cáncer. Cuando esto ocurre, los pacientes presentan tumores más agresivos.

La medición morfológica cuantitativa del índice apoptótico, especialmente por microscopía de luz, es difícil ya que los cambios celulares asociados son de corta duración.

En la apoptosis ocurre fragmentación del ADN, la que puede ser detectada y marcada enzimáticamente mediante la técnica denominada TUNEL (terminal transferense mediaded dUTP-biotin nick end labelling). Permite detectar estados tempranos de apoptosis, incluso antes que el núcleo experimente los primeros cambios morfológicos.

El Tumor Venéreo Transmisible (T.V.T), se caracteriza por presentar una fase de crecimiento progresivo muy acelerado con gran destrucción tisular local. Sin embargo, el tratamiento con sulfato de Vincristina, a diferencia de lo que ocurre en otras neoplasias, induce la regresión de la masa tumoral hasta su completa desaparición

En este trabajo se seleccionaron 10 caninos adultos con TVT de ubicación genital en fase progresiva de crecimiento para inducirles regresión tumoral con Sulfato de Vincristina en dosis única de 0.03mg/Kg. Se obtuvieron muestras histológicas para estudiar el comportamiento apoptótico del tumor después del tratamiento, mediante la técnica de inmunotinción TUNEL. Se digitalizaron imágenes que fueron analizadas con un software morfométrico (Image Pro-Plus, Media Cybernetics, USA).

Se observó una intensa inmunomarcación para apoptosis en tejidos de TVT en fase regresiva, involucrando muchas células que no presentaban aún cambios morfológicos asociados a apoptosis, contrastando con una inmunomarcación ocasional, de células aisladas, en la fase progresiva de crecimiento. El área promedio de células apoptóticas fue de 51.3±37.9m2 y 1396±828.6m2, por campo de 200X, para fase progresiva y regresiva, respectivamente, indicando una diferencia significativa entre ambas fases (p<0.0001).

El tipo celular principal dentro de la población apoptótica, en ambas fases, correspondió a células tumorales con un 80.7% para fase progresiva y 89.4% para fase regresiva. Mientras, que los linfocitos representaban un 16.1% y 8.4%, en las fase progresiva y regresiva, respectivamente. Las epiteliales constituían sólo un 3.2% en fase progresiva y 2.2% en fase regresiva.

Dentro de la población apoptótica, las células de T.V.T. mostraron un aumento significativo en fase regresiva (p<0.001). Los linfocitos disminuyeron en forma significativa en regresión (p<0.001). En cambio, la disminución registrada en las células epiteliales en fase regresiva no fue estadísticamente significativa (p ≥0.05).

Este estudio indica que la Vincristina induce regresión en T.V.T. a través de apoptosis, llevando al colapso de la masa tumoral. El mecanismo por el cual la Vincristina induciría apoptosis en T.V.T. permanece aún por aclarar, sin embargo se ha demostrado, en otras neoplasias, activación de caspasas 9 y 3, sugiriendo que este tratamiento induce apoptosis por la vía mitocondrial, involucrando mecanismos asociados a la generación de radicales derivados del oxígeno y sobre expresión de gen Bcl-2