Implementación y validación de metodologías analíticas por cromatografía líquida acoplada a espectometro de masas (LC MS/MS) para la detección de tetraciclinas en plumas y tejidos comestibles de pollos broiler

Abstract

Los antimicrobianos en animales productivos son la principal herramienta terapéutica para combatir enfermedades bacterianas, sin embargo su uso incorrecto puede derivar en la presencia de residuos en los productos y subproductos de origen animal. Cuando sobrepasan los Límites Máximos Residuales (LMR) son un riesgo para la salud de la población y una causa del aumento de la resistencia microbiana. Las plumas como subproducto son utilizadas en piensos y según estudios previos acumulan residuos antimicrobianos, de esta forma son una ruta de reingreso de residuos antimicrobianos a través de la cadena alimentaria. Para comparar concentraciones presentes de tetraciclinas en plumas con las de los tejidos, es imprescindible la validación de las metodologías analíticas implementadas para la detección de Tetraciclinas en estas matices por lo cual el objetivo del estudio fue validar metodologías analíticas mediante cromatografía liquida acoplado a detector de masas (LC-MS/MS) para detectar y cuantificar Oxitetraciclina, Clortetraciclina y sus metabolitos activos en plumas, músculo e hígado. Se utilizaron 20 pollos broiler criados con una dieta libre de antimicrobianos. El análisis fue mediante LC-MS/MS, utilizando columnas de extracción en fase sólida OASISTM HLB y sep-pak C18. Los resultados indican que las metodologías implementadas son válidas ya que cumplen con los criterios descritos por la FDA: VICH GL49 y la Directiva 2002/657/CE, siendo precisas, selectivas y lineales. Todas las curvas presentaron un coeficiente de determinación (R2) >0,95 y una recuperación para todos los analitos mayor a 90%. Mediante las metodologías validadas es posible detectar y cuantificar tetraciclinas, en las tres matrices con un límite de detección de 20 μg/kg-1

Antimicrobials in livestock are the main therapeutic tool for the combat of bacterial diseases, however the inadequate use may result in the presence of residues in animal edible and non-edible (byproducts) tissues. When exceeding Maximum Residue Limit (MRL) are a risk to the health of the population and a cause of increased antimicrobial resistance. Among the byproduct, feathers are used in feed and according to previous studies can accumulate antimicrobial residues, in this way is a route re-entry of antimicrobial residues via food chain. To compare concentrations of tetracycline present in feathers with tissue, it is essential to validate analytical methodologies implemented for the detection of tetracyclines in these matrices, so the aim of the study was to validate analytical methodologies by liquid chromatography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS) to detect and quantify Oxytetracycline, Chlortetracycline and it's metabolites in feathers, muscle and liver. 20 broiler chickens were used, raised with a diet free of antibiotics. The analysis was made by LC-MS / MS, using columns of solid phase extraction OASISTM HLB and sep-pak C18. The results indicate that the implemented methods are valid because they meet the criteria described by the FDA: VICH GL49 and Directive 2002/657 / EC, to be precise, selective and linear. All curves showed a coefficient of determination (R2)> 0.95 and a recovery for all analytes greater than 90%. By validated methods can detect and quantify Tetracyclines, in the three matrices with a detection limit of 20 mg / kg-1