Caracterización funcional del producto génico ITRG7 de Arabidopsis Thaliana

Abstract

En Arabidopsis thaliana, mediante análisis¡s de coexpresión, se identificó un nuevo producto génico posiblemente involucrado en estrés iónico, al cual hemos denominado |TRGT (Ion Transport Related Gene 7). Sin embargo, ITRGT no posee función o rol biológico reportado. Mediante análisis bioinformáticos de la secuencia aminoacídica de ITRGT se han identificado aspectos estructurales, como la presencia de l0 dominios transmembrana, un péptido señal y dos dominios que asocian a ITRGT a la familia de exportadores multidrogas y metabolitos en plantas. Utilizando plantas de Arabidopsis tipo silvestre se encontró que los niveles de transcrito de IRG7 disminuyen cuando las plantas son crecidas en medios enriquecidos en cadmio, cobre o cloruro de sodio. Con estos antecedentes, se planteó abordar el estudio en el contexto de estrés iónico de esta proteína mediante dos aproximaciones: genética reversa en Arabidopsis thaliana y expresión heteróloga en Saccharomyces cerey¡srae. En la primera aproximación se empleó y caracterizó una línea mutante insercional denominada itrg7-1, la cual es una mutante pérdida de función, con un 60% menos de niveles de transcrito de |TRG7. Presenta una tasa de geminación similar a plantas tipo silvestre y es afectada por tratamientos con cadmio, cobre o sal de manera similar a plantas tipo silvestre. No obstante, posee mayor peso fresco que plantas tipo silvestre y mayor largo de raíz que plantas tipo silvestre luego de tratamientos con l50mM de NaCl. La expres¡ón heteróloga de ITRGT en levadura no es perjudicial. Sin embargo, al crecer levaduras transformante ITRGT en medios enriquecidos con iones, éstas poseen menor tolerancia a estrés iónico que levaduras control. Por último, la proteína recombinante ITRGT-GFP se localiza en un compartimiento subcelular de identidad desconocida. La evidencia recopilada en este trabajo da luces sobre la participación de IRG7 en estrés iónico