Pcc1/Pig-P son requeridas para la correcta síntesis de proteínas y desarrollo de Drosophila melanogaster

Abstract

La modificacion N(6)-treonilcarbamoiladenosina (t(6)A) de ARNts es conservada y esencial para el crecimiento celular. Esta modificacion es sintetizada por Sua5 y transferida por el complejo KEOPS. En Drosaph/./a existen homologos para 3 de los componentes del complejo: Kae7, Prptrypcc7, pero no para el componente Cgil21 de levadura. Previamente en el laboratorio se demostr6 que existe interacci6n entre Kae1 y Prpk, y que ambas proteínas son requeridas para sintetizar esta modificacion. EI papel de Pccl no ha sido caracterizado. Pccl es codificado en Drosaph/./a por un gen biscistronico, que tambien codifica Pig-P. Para evaluar la participación de Pccl en el complejo KEOPS hicimos Co-lp entre Pccl y Prpk, mostrando que Pccl interactiva con el complejo. Con un ARNi inducible contra P/.g-P se analizaron los efectos del knock down de ambas proteínas. Observamos que su p6rdida de funci6n genera problemas en el desarrollo. Ademas, se produce activación de la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR). Por último, se genero un animal transgenico que permite expresar un mensajero para ambas proteínas fusionadas en sus extremos N-y C-terminal a un tag diferente. Determinamos que los niveles de expresión de cada proteína es dependiente del tipo celular en el cual se expresa el constructo; c6lulas en proliferacion poseen mayores niveles de Pccl-HA que células diferenciadas. Estos datos sugieren que Pccl es parte del complejo KEOPS, y que los fenotipos observados se deben a la perdida de esta proteína. Sin embargo, no es posible descartar la contribucion de Pig-P. La expresión diferencial de Pccl en distintos tejidos podrían revelar una nueva forma de regular la cantidad de ARNt modificados, y por ende, el proceso de traducci6n en general.