Genómica de dinoflagelados tóxicos : preparación y caracterización de genotecas de ADN complementario de Alexandrium catenella

Abstract

Las floraciones algales son fenómenos naturales que ocurren normalmente en los mares y aguas dulces del mundo. Algunas de estas floraciones pueden ser nocivas para el hombre y mamíferos superiores, debido que algunas de estas microalgas producen potentes toxinas, que pueden ser incluso letales para el hombre. Dichos episodios significan un gran impacto en salud e importantes p6rdidas econ6micas, sociales y turísticas para la zona afectada. EI Veneno Paralizante de Marisco (VPM) es una de las mas nocivas de estas toxinas, perteneciente a la familia de las saxitoxinas. En Chile, la principal especie productora de VPM es el dinoflagelado Alexandrium Catenella presente en las regiones X, XI y Xll. Con el fin de obtener información respecto de la biología de esta especie, se decidi6 iniciar estudios genomicos en ella, para ello se elaboraron dos genotecas de ADN complementario (ADNc) a partir de ARN mensajero obtenido de cultivos de A. catenella. La genoteca 1 se realizo a partir de un cultivo original que contenía 3xl04 bacterias asociadas por dinoflagelado, y la genoteca 2 a partir de un cultivo sometido a tratamientos de lavados y antibioticos, para eliminar las bacterias asociadas. De las 1.264 secuencias totales obtenidas y analizadas solo un 17.1% posee una homología aceptable (valor de E<10-3 e identidad >30%) con secuencias encontradas en GenBank. En la genoteca 2 se obtuvo un aumento importante en el número de secuencias de dinoflagelados (de 3.40/o a 33.3°/a) y una disminuci6n en el numero de secuencias de origen bacteriano (de 37.6°/o a 6.1%), esto muestra la importancia de trabajar con cultivos axenicos en este tipo de estudios. Analizando los grupos de ortologos de proteinas (COGs), la mayor parte de las secuencias con homología aceptable se clasifica en el grupo de funcion desconocida (38°/o en la genoteca 1 y 54% en la genoteca 2). Entre los genes de dinoflagelados encontrados, los mas relevantes son: citocromo b y c, gljceraldehido-3P deshidrogenasa, ARNr, HSP90 (Heat Shock Protein 90) y Pop (peridinin-chlorophyll protein), estos genes son .importantes en estudios filogenoticos y en evolucion de la endosimbiosis secundaria en dinoflagelados. En general, los resultados de esta genoteca concuerdan con aquellos obtenidos por otros autores en genomica de dinoflagelados, debido principalmente a la carencia de informacion a nivel molecular, específicamente en la cantidad de genes secuenciados e identificados de este grupo