Mutagénesis dirigida de la integrasa del virus moleney MLV

Abstract

Les integrasas IN) retrovirales catalizan la integración del ADN viral en el genoma del hospedero.Actualmente no se dispone de información cristalografica en la IN del virus de la leucemia murina de Moloney Or-MULV), por lo que se desconoce como se asocian sus tres dominios estructurales y como interaccionan con el ADN viral. Previamente, en nuestro laboratorio, hemos realizado estudios de entrecruzamiento químico y fotoentrecruzamiento,inutilizados sintéticos que imitan al intemediario de integración. Estos estudios han revelado que existiría una interacción entre la region 5` (cola) de este sustrato y una región central, flexible, que posee los aminoácidos LHCAY. De acuerdo a la especificidad del agente entrecruzante utilizado,(5-iodouridina),el residuo de histidina 208 seria un blanco en la reacción.Con el propósito de probar esta hipótesis se diseño una construcción de fa mutante IN H208A 106-404, enzima que ademas de carecer del dominio N-terminal, presenta una sustitución de histidina por alanita en la posicion 208