Análisis de triterpenos en extractos de hoja de Salvia hispánica L. y ensayo antiparasitario y antiproliferativo de sus metabolitos secundarios

Abstract

La Salvia hispanica L., comúnmente conocida como chía, es una planta originaria del sur de México que ha despertado el interés científico en los últimos años debido a las excelentes propiedades nutricionales atribuidas a su semilla, las cuales ya han sido ampliamente reportadas, sin embargo, de sus partes aéreas hay reducidos trabajos científicos. Los terpenos son sustancias químicas naturales formadas por el reordenamiento de dos o más moléculas de isopreno con propiedades antimicrobianas, antifúngicas, antibacterianas, antiproliferativas y antivirales, entre otras. Los antecedentes demuestran que se han identificado una serie de compuestos polifenólicos, así como monoterpenos y sesquiterpenos en Salvia hispanica L. De acuerdo con lo anterior, uno de los propósitos de este estudio fue identificar y cuantificar cinco triterpenos: ácido madecásico, ácido asiático, ácido betulínico, ácido oleanólico y ácido ursólico en extractos secuenciales de hoja de Salvia hispanica L. procedentes de dos fenotipos comerciales de chía (blanca y negra), los cuales se prepararon con solventes de polaridad creciente (hexano, diclorometano, acetato de etilo y etanol), obteniéndose así 8 extractos en total. Para su determinación se utilizó cromatografía liquida de alta eficiencia, en fase reversa con detector espectrofotométrico con arreglo de diodos (DAD). Para la cuantificación de los compuestos se realizaron curvas de calibración externa en concentraciones de 0,5 – 80 mg/L, y luego se midieron los extractos de hoja de Salvia hispanica L. en las mismas condiciones. Se lograron determinar los cinco triterpenos en los diferentes extractos, y se obtuvo que en los extractos de hexano la concentración de triterpenos fue mayor que en los extractos de solventes más polares, siendo el orden de concentración: hexano>diclorometano>acetato de etilo>etanol. Además, se encontró que en general los extractos de hoja de semilla negra la concentración de triterpenos fue mayor que en los extractos de hoja de semilla blanca, en el caso de los extractos de hexano tuvieron un porcentaje mayor de 29% ácido madecásico, 8% ácido asiático, 28% ácido betulínico, 17% ácido oleanólico y 20% ácido ursólico, que su contraparte blanca. Por otro lado, se realizaron curvas de adición de estándar para verificar la señal de los compuestos y evidenciar el efecto matriz en la muestra. De manera adicional se realizaron estudios antiparasitarios y antiproliferativos a los 8 extractos de chía, obteniéndose que los extractos no son citotóxicos incluso a 200 mg/L, pero no tiene capacidad antiparasitaria, sin embargo, se hizo el estudio antiparasitario a los estándares de triterpenos a concentraciones de 20 y 200 mg/L, obteniéndose que algunos de ellos, como el ácido asiático y el ácido ursólico si tienen capacidad antiparasitaria. Por lo cual las concentraciones de estos compuestos en los extractos no fueron suficientes para presentar capacidad antiparasitaria.

Salvia hispanica L., commonly known as chia, is a plant native to southern Mexico that has arised scientific interest in recent years due to the excellent nutritional properties attributed to its seed, which have already been widely reported. However, of its aerial parts there are reduced scientific works. Terpenes are natural chemical substances formed by the rearrangement of two or more isoprene molecules with antimicrobial, antifungal, antibacterial, antiproliferative, and antiviral properties, among others. A series of polyphenolic compounds, as well as monoterpenes and sesquiterpenes have been identified in S. hispanica L. Based on this information, one of the purposes of this study was to identify and quantify five triterpenes: madecassic acid, asiatic acid, betulinic acid, oleanolic acid and ursolic acid in sequential extracts of S. hispanica L. leaves from two commercial chia phenotypes (white and black). Extracts were prepared with solvents of increasing polarity (hexane, dichloromethane, ethyl acetate and ethanol), thus obtaining 8 extracts in total. For its determination, reverse phase high performance liquid chromatography was used, coupled with a spectrophotometric diode array detector (DAD). For the quantification, external calibration curves were performed at concentrations of 0.5 – 80 mg/L. It was possible to determine the five triterpenes in the different extracts, with the hexane extracts having the highest concentration of triterpenes than the more polar solvent extracts, the order of concentration being: hexane>dichloromethane>ethyl acetate>ethanol. In addition, in general the concentration of triterpenes in the black phenotype extracts was higher than in the white phenotype extracts. Particularly the black hexane extracts had 29% madecassic acid, 8% asiatic acid, 28% betulinic acid, 17% oleanolic acid and 20% ursolic acid, higher amount than its white counterpart. On the other hand, standard addition curves were performed to verify the signal of the compounds and show the matrix effect in the sample. Additionally, antiparasitic and antiproliferative studies were carried out on the 8 chia extracts, obtaining that the extracts are not cytotoxic even at 200 mg/L, but they do not have antiparasitic activity. However, the antiparasitic study was carried out with the triterpene standards at concentrations of 20 and 200 mg/L, obtaining that some of them, such as asiatic acid and ursolic acid, do have antiparasitic activity. Therefore, the concentrations of these compounds in the extracts were not sufficient to present antiparasitic activity.