El factor de transcripción ZEB1 disminuye la síntesis de andrógenos en la línea celular DU145 de cáncer prostático

Abstract

En Chile el cáncer de próstata (CaP) constituye la segunda causa de muerte por cáncer en el sexo masculino. Dentro de la progresión tumoral para establecer la metástasis se ha destacado al proceso llamado transición epitelio mesénquima (TEM) como parte fundamental del aumento de malignidad. La TEM, induce un cambio en las células tumorales hacia un fenotipo mesenquimal, el cual se caracteriza por una pérdida de las adhesiones celulares y por una modificación en la polaridad ápicobasal de las células epiteliales, confiriéndole a las células mayores capacidades migratorias e invasivas. Este proceso es controlado por el factor de transcripción ZEB1, el cual no sólo reprime la expresión de E-cadherina, sino que también ha sido vinculado con la regulación de la expresión del receptor de andrógenos (AR), el cual tiene como ligando a la testosterona y DHT. Estos andrógenos se sintetizan a través de la vía esteroidogénica, la cual se ha encontrado alterada en CaP. Con los antecedentes mencionados se plantea la siguiente hipótesis: “El factor de transcripción ZEB1 disminuye la síntesis de andrógenos in vitro”. Para responder esto se propone como objetivo general: Determinar los cambios inducidos por ZEB1 y las alteraciones asociadas a la síntesis de andrógenos y su receptor in vitro, en la línea celular de cáncer prostático DU145. Para evaluar lo anteriormente propuesto se determinará mediante qRT-PCR, western blot o inmunocitoquímica los niveles de mRNA, proteínas y localización celular de marcadores de TEM, AR y de la vía esteroidogénica, en la línea celular de cáncer de próstata DU145 con silenciamiento de ZEB1. Además se detectará la presencia de testosterona y DHT en el medio de cultivo de estas líneas celulares. Se espera que a menor expresión de ZEB1 se induzca un fenotipo más epitelial y que aumenten los niveles de andrógenos y su receptor. Esto permitirá dilucidar si ZEB1 está involucrado en los cambios de la esteroidogénesis intratumoral durante la TEM en CaP.

In Chile, prostate cancer is currently the second leading cause of cancer-related deaths in men. Among the factors contributing to tumor progression towards metastasis, epithelial to mesenchymal transition program (EMT) has been highlighted as a key part in the increase in malignancy, by promoting a change in tumor cells towards a mesenchymal phenotype, characterized by a loss in cell-cell adhesions and by a modification in the apicobasal polarity of epithelial cells, making the cells more migratory and invasive. This process is controlled by the e-cadherin repressor ZEB1. ZEB1 has also been involved in the regulation of the expression of the androgen receptor, whose ligands are testosterone and DHT. These androgens are synthesized through the steroidogenic pathway, which has been reported to be altered in prostate cancer. With all this information the following hypothesis is proposed: “The transcription factor ZEB1 promotes tumoral malignancy by diminishing the androgens synthesis capacity in vitro”. To answer this, the general objective will be: Determine changes and alterations induced by ZEB1 in the androgens synthesis and their receptor in vitro, in the prostate cancer cell line DU145. To answer what has been proposed, qRT-PCR, Western blot and immunocytochemistry will be used to determine the mRNA, protein levels and cellular localization of EMT markers and enzymes of the steroidogenic pathway in the DU145 cell line with ZEB1 silencing. The concentrations of testosterone and DHT in the culture medium of these cells will also be determined. It is expected that a lower expression of ZEB1 will induce a more epithelial phenotype with higher levels of androgens and their receptor. This will help to understand the role of ZEB1 in the changes in intratumoral steroidogenesis during the epithelial to mesenchymal transition in prostate cancer.