Estudio de la reactividad de anticuerpos anti-CS20 con los factores de colonización CS27 y CS30 de Escherichia coli enterotoxigénica

Abstract

Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) es uno de los principales patógenos causantes de diarrea en el mundo, siendo responsable de miles de muertes anuales. Los factores de colonización (CFs) son importantes por su rol en la patogenicidad de ETEC y, de ellos, los que pertenecen a la familia γ2 (CF- γ2) han sido de interés recientemente. En este trabajo, se estudió la reactividad cruzada de anticuerpos policlonales dirigidos contra CsnA, la subunidad estructural principal de CS20, un CF-γ2, con las cepas ETEC 603388 y 702947, productoras de CS27 y CS30, respectivamente, además de analizar la funcionalidad de CS27. Ensayos de Western blot muestran que hay reactividad con el anticuerpo anti- CsnA en las cepas silvestres y no en las mutantes carentes de CS27 o CS30. Ensayos de inmunomarcación con oro coloidal también evidenciaron reactividad cruzada. Ensayos sobre células Caco-2 mostraron que hubo disminuciones significativas en el nivel de adherencia de las cepas mutantes de CS27 y CS30 con respecto a las silvestres, y estos niveles fueron restablecidos con la complementación de CS27, pero no de CS30. El efecto de los anticuerpos a nivel funcional también fue evaluado en ensayos de adherencia. Los resultados indican que los anticuerpos no alteran significativamente la adherencia de las cepas ETEC productoras de CS27 o CS30. En este trabajo se comprueba la funcionalidad de CS27 como pilus de adherencia de ETEC y se confirma la reactividad cruzada entre los anticuerpos anti-CsnA con CS27 y CS30.

Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) is one of the leading causes of diarrhea in the world, causing to thousands of deaths per year. Colonization factors (CFs) are important because of their role in ETEC pathogenicity, and those of the γ2 family (CFs-γ2) in particular have recently been of interest. In this work, the crossreactivity between polyclonal antibodies developed against CsnA, the major structural subunit of CS20, a CF-γ2, and ETEC strains 603388 and 702947, producing CS27 and CS30, respectively, was studied, along with the analysis of the functionality of CS27. Western blot assays showed the reactivity between the anti-CsnA antibodies and the wild-type strains, and not in the mutant strains lacking CS27 or CS30. Immunogold staining assays gave similar results, indicating that there is indeed cross-reactivity. Cell adherence assays on Caco-2 cells showed that there were significant decreases in the mutant strains compared to the wild strains, and these levels were restored with the complementation of CS27, but not of CS30. The functional effect of the antibodies was evaluated in similar adherence assays. The results indicated that the antibodies do not significantly alter the adherence of ETEC producing CS27 or CS30. In this work, the function of CS27 as an ETEC adherence determinant was proven, along with the cross-reactivity of anti-CsnA antibodies with CS27 and CS30.