Evaluación de la activación del sensor de la respuesta a proteínas mal plegadas IRE1 en células dendríticas estimuladas con cuerpos celulares infectados con el virus de la influenza

Abstract

Las células dendríticas convencionales de tipo 1 (cDC1s) desempeñan un papel crucial en la respuesta inmune antiviral al activar las células T CD8+ (citotóxicas), las cuales son esenciales para eliminar células infectadas por virus. Las cDC1s dependen críticamente de una función optima del retículo endoplasmático (ER), organelo responsable de la síntesis, plegamiento y maduración de proteínas de membrana y secretadas, además de mantener la homeostasis proteica a través de un mecanismo conocido como la respuesta a proteínas mal plegadas (UPR por su sigla en inglés unfolded protein response). En este contexto, el sensor IRE1 (inositol-requiring enzyme type 1) de la UPR y su factor de transcripción asociado XBP1s (X-box binding protein 1 spliced) controlan aspectos fundamentales de las cDC1s, incluida la presentación de antígenos, sobrevida y diferenciación. Sin embargo, a pesar de su importancia en la respuesta inmune, se desconoce el papel del eje IRE1/XBP1s en la respuesta inmune antiviral mediada por cDC1s, especialmente en el contexto de la infección por el virus de la influenza A (IAV). Las cDC1s presentan una interesante particularidad al ser naturalmente resistentes a la infección directa por varios virus envueltos, incluido el IAV. No obstante, estas células tienen la capacidad de detectar la presencia de la infección viral mediante la endocitosis de células infectadas. Dada la importancia de comprender los mecanismos inmunológicos que coordinan la respuesta inmune antiviral, se vuelve relevante investigar el papel del eje IRE1/XBP1s en cDCs activadas por células infectadas con IAV. Nuestros resultados indican que cDCs al ser estimuladas con cuerpos celulares de MDCK infectadas con IAV, no inducen activación del eje IRE1/XBP1, según lo evaluado mediante citometría de flujo utilizando cultivos obtenidos de un ratón reportero para la actividad RNasa de IRE1 (Modelo ERAI). Además, mediante RT-qPCR se observa una tendencia en cDCs, tras la estimulación con células infectadas con el IAV, incrementan la expresión de genes asociados a citoquinas proinflamatorias incluyendo IFN1-α, IFN1-β, IL-1, IL-6, IL-12 y TNF-α. Estos hallazgos sugieren que existe un reconocimiento y activación de las cDC1s en respuesta a los cuerpos celulares infectados con el virus, y es plausible que este estímulo esté asociado con el inicio de una respuesta inmunológica antiviral. Sin embargo, nuestra evidencia no permite aseverar que estos procesos estén relacionados con activación del eje IRE1/XBP1s. Estos resultados proporcionan una base inicial para futuras investigaciones sobre la función de las cDC1 y su contribución específica a la inmunidad antiviral.

Conventional type 1 dendritic cells (cDC1s) play a crucial role in the antiviral immune response by activating CD8+ T cells (cytotoxic), which are essential for eliminating virus-infected cells. cDC1s critically depend on optimal function of the endoplasmic reticulum (ER), an organelle responsible for the synthesis, folding, and maturation of membrane and secreted proteins, as well as for maintaining protein homeostasis through a mechanism known as the unfolded protein response (UPR). In this context, the UPR sensor IRE1 (inositol-requiring enzyme type 1) and its associated transcription factor XBP1s (X-box binding protein 1 spliced) control fundamental aspects of cDC1s, including antigen presentation, survival, and differentiation. However, despite their importance in the immune response, the role of the IRE1/XBP1s axis in the antiviral immune response mediated by cDC1s, especially in the context of influenza A virus (IAV) infection, is unknown. cDC1s present an interesting feature as they are naturally resistant to direct infection by various enveloped viruses, including IAV. However, these cells can detect the presence of viral infection by endocytosis of infected cells. Given the importance of understanding the immunological mechanisms that coordinate the antiviral immune response, it becomes relevant to investigate the role of the IRE1/XBP1s axis in cDCs activated by cells infected with IAV. Our results indicate that cDCs, when stimulated with MDCK cell bodies infected with IAV, do not induce activation of the IRE1/XBP1 axis, as evaluated by flow cytometry using cultures obtained from a reporter mouse for IRE1 RNase activity (ERAI Model). Furthermore, RT-qPCR reveals a trend in cDCs, after stimulation with cells infected with IAV, to increase the expression of genes associated with proinflammatory cytokines including IFN1-α, IFN1-β, IL-1, IL-6, IL-12, and TNF-α. These findings suggest that there is recognition and activation of cDC1s in response to cell bodies infected with the virus, and it is plausible that this stimulus is associated with the initiation of an antiviral immune response. However, our evidence does not allow us to assert that these processes are related to activation of the IRE1/XBP1s axis. These results provide an initial basis for future research on the function of cDC1s and their specific contribution to antiviral immunity.