Clonalidad de cepas patógenas y comensales de Candida albicans de pacientes humanos con candidemia mediante técnicas moleculares

Abstract

Candida albicans es una levadura comensal que forma parte de la microbiota de las mucosas en el hombre, sin embargo es también un patógeno oportunista, responsable de infecciones invasoras, principalmente nosocomiales endógenas, las que presentan una alta morbiletalidad. Debido a que el estado sexual no es conocido en C. albicans, se espera que su estructura poblacional sea primariamente clonal, por esta razón un individuo puede portar clones de una cepa colonizante, en distintos lugares anatómicos, los que bajo ciertas condiciones, principalmente del hospedero, pueden producir infección. En Chile no existen estudios que revelen la relación de origen entre cepas colonizantes e infectantes, por lo tanto, resulta relevante profundizar el conocimiento sobre la epidemiología de la infección por C. albicans. El objetivo de este trabajo fue analizar genéticamente cepas patógenas de C. albicans, aisladas de hemocultivo, y cepas comensales provenientes de sitios colonizados de un mismo paciente con diagnóstico comprobado de candidemia, con el fin de determinar la relación de origen de estas cepas. Para esto, se analizaron molecularmente 35 cepas, identificadas previo al estudio como C. albicans, provenientes de ocho pacientes internados en Unidades de Pacientes Críticos del Hospital Clínico de la Universidad de Chile. De estas 35 cepas, cuatro se identificaron posteriormente como C. dubliniensis y provenían de un mismo paciente. Las cepas de C. albicans y C. dubliniensis fueron genotipificadas inicialmente mediante el método de Amplificación Aleatoria del ADN Polimórfico (RAPD), utilizando cinco partidores con actividad discriminatoria intraespecie. Se determinó el grado de similitud entre cepas mediante Coeficiente de Dice y se construyó un dendrograma, mediante el método UPGMA (Unweighted Pair Group Method Whit Arithmetic Averages). Los resultados mostraron que casi en la totalidad de los pacientes, los aislados propios de cada uno fueron agrupados en “cluster” únicos con una alta similitud genética (SAB ≥ 0.9), demostrando el origen clonal de los aislados y, en algunos casos, la existencia de fenómenos microevolutivos y reemplazo de cepas. 2 Posteriormente se analizaron las cepas de C. albicans a través de la Electroforesis en Gel con Gradiente Desnaturante (DGGE), mediante la amplificación de la porción final del 18S, el ITS1, el 5.8S y parte del ITS2 del ADN ribosomal. Los resultados del DGGE mostraron que las bandas pertenecientes a cada uno de los aislados en estudio migraron a la misma altura, sin conseguir evidenciar las diferencias genéticas existentes entre aislados de un mismo paciente y entre pacientes. El análisis estadístico, mediante el Test de McNemar, permitió establecer que el método de RAPD presenta un mayor rendimiento que el DGGE para la genotipificación de cepas de Candida spp. Finalmente, al comparar ambos métodos de genotipificación, sólo el RAPD pudo determinar que las cepas patógenas y comensales de C. albicans, provenientes de un mismo paciente con candidemia, están en su gran mayoría, relacionadas clonalmente.