Establecimiento de una fase sólida para la detección de anticuerpos contra Piscirickettsia salmonis

Abstract

En el presente estudio se investigó la factibilidad de establecer una fase sólida para realizar un ELISA con el fin de detectar anticuerpos contra Piscirickettsia salmonis. Se realizaron varias etapas en el protocolo de purificación, para la obtención del antígeno. Se obtuvo un antígeno soluble de P. salmonis mediante extracción salina, se realizaron centrifugaciones y se liofilizó la muestra, obteniendo 567 g de antígeno, de los cuales se detectó una cantidad de 0,1 mg de proteína. En las condiciones del ensayo se utilizaron dos tipos de placas, dos tampones de sensibilización y se realizaron incubaciones a diferentes temperaturas. Para el desarrollo de la prueba de ELISA se utilizó una mezcla de anticuerpos monoclonales específicos contra P. salmonis y un antisuero conjugado de cabra anti-ratón. Como resultados, se obtuvieron reacciones negativas en todos los casos, sin haber alcanzado la razón de adsorción mínima para darle significancia al resultado; sin embargo, existió reacción colorimétrica visible en aquellas muestras procesadas en placas NUNC 69620, incubadas a temperatura ambiente, con tampón de sensibilización carbonato-bicarbonato con pH 9,6; por lo que se podría deducir que entre todos los procedimientos, este último protocolo podría ser el de elección. Como conclusión se establece que, bajo los protocolos realizados y con las concentraciones antigénicas utilizadas, no fue posible comprobar la adhesión de antígenos de Piscirickettsia salmonis a las placas, no pudiéndose establecer una fase sólida para el diagnóstico de esta bacteria por medio de la detección de anticuerpos..