Diagnóstico in vivo de Scrapie mediante inmunohistoquímica en tejido linfoide del tercer parpado en ovinos

Abstract

El Scrapie es una enfermedad neurodegenerativa producida por priones que afecta a ovinos y caprinos, descrita desde el siglo XVIII. El prion es una proteína de conformación anormal que se propaga transformando la isoforma normal del hospedero. La lesión patológica más característica es la vacuolización, ya sea en el soma neuronal o del neuropilo.

La identificación de los casos sospechosos es el primer paso en el programa de vigilancia para esta enfermedad. La técnica de inmunohistoquímica, se utiliza para evidenciar el depósito de la proteína patológica en el tejido nervioso como el óbex, lo cual limita el diagnóstico a ser realizado solo después de la muerte del animal. Por esto, es necesaria una herramienta que entregue información de los animales en los estados preclínicos, así la biopsia de tejido linfoide de tercer párpado, ha sido descrita para realizar estudios in vivo de Scrapie en ovejas y cabras.

Con estos antecedentes, se realizó este estudio en animales vivos en nuestro país, de la Región Metropolitana, con el fin de estandarizar la técnica de inmunohistoquímica (IHQ) y desarrollar un protocolo in vivo, adecuado a nivel del laboratorio país. Chile ha sido declarado libre de Scrapie, para esto el Servicio Agrícola y Ganadero (SAG), cuenta con herramientas diagnósticas como la IHQ, la histopatología, el Western Blot y el ELISA, que son realizados post mortem.

En este estudio se muestrearon 75 ovejas mayores de dos años de edad, de las cuales se extrajo el tejido linfoide del tercer párpado. Las muestras fueron sometidas a tinción Hematoxilina-Eosina (H-E) para clasificar su aptitud de acuerdo a la cantidad de centros germinales. De la totalidad de las muestras, 50 fueron clasificadas como aptas para continuar con la técnica de IHQ, lo que corresponde a un 66,6% de los individuos muestreados, esto porque la cantidad de centros germinales del tejido linfoide necesarios para diagnosticar una muestra como negativa debe ser igual o mayor a 4

Todas las muestras evaluadas por IHQ fueron negativas a Scrapie, al no presentar en ninguno de los centros germinales el precipitado granular rojo que evidencia la

inmunoreacción de la proteína priónica, además de compararlas con los controles positivos y negativos aportados por un centro de referencia canadiense.

La técnica basada en la biopsia de tejido linfoide de tercer párpado ovino, demostró la factibilidad de ser realizada en condiciones de laboratorio país, lo cual podría entregar información precoz sobre el estado sanitario de la masa ovina en lo referido a Scrapie.

En este trabajo se logró la obtención de tejido linfoide de tercer párpado viable de ovinos, su clasificación y con ello validar y estandarizar la IHQ en este tejido a partir de muestras obtenidas in vivo, lo que demuestra la aplicabilidad y la capacidad de usar esta nueva herramienta diagnóstica en la masa ovina nacional, para así ser utilizada como técnica in vivo de screening, en programas de vigilancia, diagnóstico y control de Scrapie en Chile