Detección molecular del gen de la polimerasa grande (L) del virus distemper canino

Abstract

El Virus Distemper Canino (VDC) es un agente infeccioso de amplia distribución, responsable de la enfermedad denominada Distemper Canino (DC) que afecta a una amplia diversidad de carnívoros terrestres (reportándose incluso en primates) y marinos. Afecta agresivamente a perros domésticos (con una tasa de mortalidad aproximada del 50%). Por tanto, el impacto clínico del VDC es importante. El VDC es codificado por 6 genes, N, P/V/C, M, F, H y L. Casi todos ellos se han usado para identificación de linajes y diagnóstico de la enfermedad. En este trabajo y utilizando Reacción en Cadena de la Polimerasa asociada a Retrotranscripción (RT-PCR) se analizaron 22 fragmentos de Ácido Ribonucleico (RNA) obtenidos de sangre periférica de 22 perros diagnosticados con VDC clínicamente y positivos a VDC mediante RT-PCR (gen N) con el objetivo de lograr implementar la detección del gen de la proteína grande (L) como alternativa diagnóstica. En este sentido, se diseñó un par de partidores que generaron un fragmento de ácido desoxirribonucleico (DNA) de alrededor de 450 pares de bases (pb), el cual mediante análisis bioinformático confirmó su identidad (PIN>94%). Así, esta implementación abre la discusión sobre el mejor método alternativo, en conocimiento de que la detección del gen P mediante RT-PCR anidado lo es actualmente. Un análisis de sensibilidad pondría dilucidar esta incógnita prontamente. Se concluye por tanto que esta técnica molecular ofrece un efectivo método diagnóstico para la presencia de VDC en perros domésticos.

The Canine Distemper Virus (CDV) is a widespread responsible for the Canine Distemper Disease that affects a broad diversity of carnivore mammals (and some cases in primates have been reported) globally. Domestic dogs are extensively and aggressively (with a ~50% mortality rate) infected by the CDV. Therefore, the clinical impact of the CDV is remarkable. The CDV is encoded by six genes, N, P/V/C, M, F, H and L. Almost all of which have been previously studied for lineage identification and disease diagnosis. In this study we used Reverse Polymerase Chain Reaction tests (RT-PCR) to analyseobtain 22 fragments of Ribonucleic acid (RNA) from peripheral blood of 22 subject dogs clinically diagnosed with CDV and positive to CDV by RT-PCR (N gene). The aim of this study was to implement a protocol of detection of the Large Protein Gene (L) to be employed as an alternative diagnostic. To achieve this, a pair of primers that generated a fragment of deoxyribonucleic acid (DNA) of ~450 base pairs (bp) was designed, which, using a bioinformatic analysis, confirmed its identity (PIN > 94%). Therefore, the implementation of this protocol opens the discussion about the best alternative method, within the context that the detection of the P gene through Nested RT-PCR is currently the best available protocol. A sensitivity analysis may potentially elucidate this question. Consequently, the main conclusion is that the molecular technique implemented in this study offers an effective diagnostic method to optimize the detection of VDC in domestic dogs.