Uso de la reacción en cadena de la polimerasa y de la endonucleasa de restricción BccI para la detección diferencial de cuatro serovares de Leptospira interrogans : estudio preliminar

Abstract

La leptospirosis es una enfermedad de distribución mundial, que afecta tanto a animales como a humanos. Es transmitida por la orina de todo animal infectado dentro de los cuales los roedores son uno de los más reconocidos, además de poder ingresar al organismo a través de elementos contaminados como alimentos o el agua de bebida, e incluso por mucosa o piel erosionada. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa afectan a caninos, porcinos, equinos y bovinos. Existe especial preocupación ante la posibilidad de infeccion con esta bacteria, produciendo cuadros de signología variada, desde fiebres oscilantes, enfermedad renal, hemorragias, e incluso la muerte. Producto de las características de esta enfermedad, y de los múltiples serovares patógenos de este agente, se hacen necesarios métodos diagnósticos con los cuales se pueda detectar la leptospirosis y diferenciar sus serovares, en lo posible, de una forma rápida, exacta y por su condición de enfermedad infecciosa, segura. Es así como surge la interrogante de un método diagnóstico diferencial de cuatro serovares patógenos de Leptospira, plasmados en el objetivo de esta Memoria de Titulo, añadiendo al protocolo, la participación de la enzima de restricción: BccI, del cual se obtendrán fragmentos de distinto tamaño que permitirían la discriminación entre los serovares expuestos anteriormente. Como conclusión para este estudio, la detección de Leptospira interrogans mediante PCR fue exitosa, demostrando que los partidores diseñados son específicos para este agente. No así con la diferenciación de los 4 serovares de Leptospira, debido a que la enzima de restricción escindió la doble hebra de ADN, en los 4 serovares, entregando resultados distintos a los esperados.

Leptospirosis is a world disease, affecting both animals and humans, which is transmitted by all infected animal, having the rodents as the most recognized, or enters the body through contaminated elements such as food or drinking water, and even by mucosa or eroded skin. Leptospira interrogans serovar canícola, Leptospira interrogans serovar icterohaemorragiae, Leptospira interrogans serovar pomona y Leptospira interrogans serovar grippotyphosa affect canines, pigs, horses and cattle, making it a concern since it affects pets and productive animals, producing varied signology, from oscillating fever, kidney disease, hemorrhages, to death. Due to the characteristics of this disease, and of the number of pathogenic serovars of the causative agent of this disease, diagnostic methods are necessary in order to detect leptospirosis and to differentiate its serovars in a fast, accurate and because of its infectious, safe condition. This is how the question of a differential diagnosis method of four Leptospira serovars, expressed in the objective of this work, through the molecular technique of the polymerase chain reaction (PCR), arises, adding the action of the restriction enzyme BccI, and thus generate fragments of different size for the differentiation of the serovars discussed above, by recognition of the gene encoding a lipoprotein membrane, LipL32. As conclusion for this study, the detection of Leptospira interrogans by PCR was successful also proving that the primers designed for the realization of the method are specific for this agent. Not so with the differentiation of the 4 serovars of Leptospira, because the restriction enzyme cleaves the doublé strand of DNA, in the 4 serovars, delivering different results than expected.