Estudio del potencial anti-metastasico del receptor AT2 como bloqueador de la migración de células tumorales.

Abstract

El sistema renina-angiotensina (SRA) consiste en una serie de péptidos que circulan por el torrente sanguíneo, señalizando a través de varios receptores de membrana acoplados a una proteína G. Dentro de éstos, el receptor AT2 (AT2R) es uno de los más importantes dado que se encarga de apagar las señales intracelulares encendidas por otros receptores del SRA. Esta acción la ejecuta mediante la activación de proteínas fosfatasas que desfosforilan sustratos proteicos río abajo de estos receptores, impidiendo de esta manera su sobreactivación. Aunque el SRA se describió inicialmente como un regulador de la presión arterial, actualmente se sabe que también participa en el desarrollo de diversas enfermedades, entre ellas el cáncer. Durante el desarrollo de esta enfermedad, algunos receptores del SRA promueven la adquisición del fenotipo cancerígeno, mientras que el AT2R antagoniza estos efectos, impidiendo su avance. Sin embargo, en la etapa de metástasis aún se desconocen los mecanismos moleculares por los cuales AT2R podría inhibir dicho proceso. Nuestros estudios previos han identificado una nueva vía promotora de la migración, invasión y metástasis compuesta por las proteínas caveolina-1, Rab5 y Rac-1 (vía CAV1/Rab5/Rac-1). Esta vía promueve metástasis en el cáncer de mama, colon y melanoma. Su activación ocurre cuando el primer componente de la vía, CAV1 es fosforilada en Y14 (p-Y14-CAV1), lo cual promueve la activación secuencial de las GTPasas río abajo Rab5 y Rac-1 y que en última instancia promueven la migración celular. Diversas investigaciones sugieren que la fosforilación de CAV1 en Y14 podría estar controlada por la actividad del AT2R. Considerando que el AT2R actúa activando fosfatasas, se postuló en esta tesis que este receptor inhibe la migración, invasión y metástasis dependiente de la vía CAV1/Rab5/Rac-1, promoviendo la desfosforilación de CAV1 en Y14 mediante la activación de alguna proteína fosfatasa. Todos estos antecedentes permiten formular la siguiente hipótesis de trabajo: “La activación del AT2R inhibe la vía de señalización CAV1/Rab5/Rac-1, disminuyendo la migración, invasión y potencial metastásico de células tumorales de melanoma murino B16F10 y de mama MDA-MB-231. Para probar esta hipótesis se utilizaron las líneas celulares de cáncer de melanoma B16F10 y de mama MDA-MB-231, dado que ellas si bien utilizan la vía CAV1/Rab5/Rac-1 para migrar, difieren en la expresión del AT2R, convirtiéndolas en buenos modelos para estudiar su efecto sobre esta vía transduccional. Estas células se estimularon con el agonista específico del AT2R CGP42112, de origen sintético, para evaluar sus efectos sobre la migración, invasión y metástasis. Los resultados obtenidos en este trabajo muestran que: • De las células estudiadas, solo las de cáncer de melanoma expresan el AT2R. • La activación del AT2R con CGP42112 inhibió la migración y metástasis de las células de cáncer de melanoma, mientras que solo disminuyó la migración de células de cáncer de mama cuando se sobreexpresó el AT2R. • Este efecto anti-migratorio en el modelo de melanoma se atribuyó a la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1 debido a que la activación del AT2R disminuyó los niveles de pY14-CAV1 y, consecuentemente, los niveles Rab5 y Rac-1 activos. • Finalmente la disminución de los niveles de pY14-CAV1 generado por la estimulación del AT2R con el agonista específico se puede explicar por el aumento en la actividad de PTP1B, fosfatasa responsable de la desfosforilación de este residuo. Se concluye que AT2R inhibe la migración de células tumorales de melanoma mediante la inhibición de la vía CAV1/Rab5/Rac-1.

The renin-angiotensin system (RAS) includes several peptides that circulate in the bloodstream and signal through G protein coupled receptors. The AT2 receptor (AT2R) plays a key role for such peptides because its activation quenches intracellular signaling and does so by activing phosphatases. Although the RAS was initially described as a regulator of blood pressure, it has recently implicated in the development of noncomunicable chronic diseases like cancer. While some RAS receptors promote acquisition of the transformed phenotype, AT2R it is thought to predominantly antagonize such effects. However, the molecular mechanisms of AT2R participation in meastasis have not yet been defined. Studies from our research group have identified a new pathway that promotes migration, invasion and metastasis. This pathway involves the proteins Caveolin-1 (CAV1), Rab5 and Rac-1 (via CAV1/Rab5/Rac-1) and has been shown to promote metastasis in melanoma, breast and colon cancer cells. Activation of this pathway is triggered by CAV1 phosphorylation Y14 (pY14-CAV1), which then promotes the sequential activation of the downstream GTPases Rab5 and Rac-1 to promote cell migration and invasion Some reports suggest that CAV1 phosphorylation on Y14 may be modulated by the activity of AT2R. Considering that AT2R works activating