Implementación y validación de una prueba sanguínea DIVA con antígenos ESAT-6, CFP-10 y Rv3615c para el diagnóstico de tuberculosis bovina en Chile

Abstract

La tuberculosis bovina, causada por la bacteria Mycobacterium bovis, es una de las enfermedades más importantes del ganado bovino en Chile y otros países, afectando la productividad y salud de estos animales. La vacuna contra la tuberculosis humana (BCG M. bovis) tiene ventajas para su uso en el ganado, para lo cual se debe evaluar su eficacia mediante una prueba diagnóstica capaz de discriminar animales infectados de aquellos que han sido vacunados (DIVA). En función de lo anterior, el Servicio Agrícola y Ganadero del Ministerio de Agricultura de Chile solicitó un estudio de evaluación de la aplicación de la vacuna BCG y el test DIVA para la prevención y diagnóstico de la infección por M. bovis en planteles bovinos de la zona central de Chile, del cual este estudio es parte. El propósito de este trabajo fue implementar y caracterizar un ensayo de ELISA-IFN-γ con antígenos ESAT-6, CFP-10 y Rv3615c (DIVA) para el diagnóstico de la infección por M. bovis en Chile. Se determinó que los puntos de corte que permiten la mejor combinación de valores de especificidad (Es) y sensibilidad (Se), priorizando la Es, es de 0,06 DO para el pool de antígenos PC-EC (ESAT-6 y CFP-10) y, 0,02 DO en Rv3615c; obteniendo un rendimiento diagnóstico de 61% y 45% de Se y, 82% y 90% de Es, respectivamente. Mientras el rendimiento gl rendimiento glrendimiento glrendimiento glrendimiento glrendimiento gl rendimiento glrendimiento glrendimiento glrendimiento glrendimiento global de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio obal de la prueba DIVA en este estudio fue de 68% Se y un 79% Es. Adicionalmente, el área bajo la curva ROC de los antígenos fue de 0,735 ± 0,054 en PC-EC y un 0,731 ± 0,054 en Rv3615c. Al comparar la prueba DIVA con los ensayos Bovigam 2G, qPCR-Boviman, Stonebrink y Bactec MGIT 960, se evidenciaron diferencias significativas en todas las comparaciones, una concordancia baja en relación con Bovigam 2G e, insignificante con todas las demás pruebas. Sugiriendo que las pruebas comparadas se enfocan a distintos blancos de detección que predominan en distintas fases de la infección. Estos resultados muestran que la prueba DIVA desarrollada es eficaz pero no eficiente en el diagnóstico de la infección por M. bovis

Bovine tuberculosis, caused by the bacterium Mycobacterium bovis, is one of the most important diseases of cattle in Chile and other countries, affecting the productivity and health of these animals. The vaccine against human tuberculosis (BCG M. bovis) has advantages for use in livestock, for which its effectiveness must be evaluated by means of a diagnostic test able to discriminate infected animals from those that have been vaccinated (DIVA). Based on the above, the Agricultural and Livestock Service of the Ministry of Agriculture of Chile requested a study evaluating the application of the BCG vaccine and the DIVA test for the prevention and diagnosis of M. bovis infection in bovine farms in the central zone of Chile, of which this study is part. The purpose of this work was to implement and characterize an-ELISA-IFN-γ assay with antigens ESAT-6, CFP-10 and Rv3615c (DIVA) for the diagnosis of M. bovis infection in Chile. It was determined that the cut off that allow the best combination of specificity (Sp) and sensitivity (Se) values, prioritizing the Sp, is 0.06 OD for the PC-EC antigen pool and, 0.02 OD in Rv3615c; obtaining a diagnostic yield of 61% and 45% of Se and 82% and 90% of Sp, respectively. While the overall performance of the DIVA test in this study was 68% Se and 79% Sp. Additionally, the area under the ROC curve of the antigens was 0.735 ± 0.054 in PC-EC and 0.731 ± 0.054 in Rv3615c When comparing the DIVA test with the Bovigam 2G, qPCR-Boviman, Stonebrink and Bactec MGIT 960 assays, showed significant differences in all comparisons, a low agreement in relation to Bovigam 2G and, insignificant among all the others. Suggesting that the comparative tests focus on different detection targets that predominate in different phases of the infection These results show that the DIVA test developed is effective but not efficient in the diagnosis of M. bovis infection