Caracterización de la traducción IRES-dependiente del mRNA de Denguevirus; rol de la proteína PTB como ITAF

Abstract

Denguevirus (DENV) es un virus envuelto, con genoma de RNA, simple hebra y polaridad positiva, que pertenece a la familia Flaviviridae. El mRNA viral tiene una estructura 5’ m7GpppN (cap), un sitio interno de reclutamiento de ribosomas (IRES), y carece de una cola de poly (A). El mRNA de DENV puede por tanto iniciar su traducción siguiendo un mecanismo cap-dependiente, o bien, mediante IRES, DENV-IRES. La traducción del mRNA de DENV requiere de la participación de proteínas celulares de unión al RNA (RBP). La proteína de unión al tracto de polipirimidina (PTB), es una proteína ubicua, de localización principalmente nuclear, que ha sido descrita como un factor que participa en el ciclo replicativo de DENV. PTB participa en la iniciación de la traducción de diversos mRNAs virales. Sin embargo, su potencial rol en la traducción mediada por el DENV IRES es desconocida. Basado en los anterior, en este trabajo de investigación se propuso caracterizar el mecanismo de iniciación de la traducción dependiente del DENV IRES, determinando el posible rol de la proteína PTB como un factor trans-activador de IRES (ITAF). Mediante el uso de vectores mono- y bicistrónicos se establece que el DENV IRES es funcional in vitro y en células, además que depende del tipo celular. Se muestra que la localización de PTB endógena en células infectadas es citoplasmática, mientras que en las no infectadas es principalmente nuclear. En acuerdo con un posible rol citoplasmático se estableció que el silenciamiento de PTB endógeno impacta de manera negativa sobre la actividad del DENV IRES. Se evaluó el rol de las tres isoformas de PTB: PTB1, PTB2 y PTB4 sobre la traducción mediada por el DENV IRES, estableciéndose que todas las isoformas de PTB estimulan al DENV IRES siendo PTB1 la proteína con mayor impacto, seguido de PTB2 y PTB4. En conclusión, en este estudio, se caracteriza el DENV IRES y se establece que PTB actúa como ITAF de éste IRES.