Evaluación de biomarcadores plaquetarios en la enfermedad de Alzheimer

Abstract

Antecedentes: La enfermedad de Alzheimer (EA) corresponde a la forma más frecuente de demencia en la población mundial. Se ha postulado que los niveles del péptido precursor del amiloide (APP) en plaquetas pudiesen servir como marcador bioquímico en EA. Estudios preliminares de nuestro laboratorio han demostrado que la proteína tau también se encuentra presente en plaquetas. Los mismos estudios han demostrado que existen diversas fracciones de dicha proteína en plaquetas y han sugerido que las distintas fracciones de tau presentan alteraciones en pacientes con EA, que son independientes de la edad de los sujetos. La presente tesis tuvo como meta evaluar si las variaciones en la tau plaquetaria podrían constituir un biomarcador útil de EA. -. Métodos: Se tomaron muestras de sangre venosa de 47 sujetos portadores de EA probable y 19 controles pareados por edad. Se aislaron las plaquetas y se realizaron estudios de inmunofluorescencia de tau en dichas células. Extractos de proteínas plaquetarias fueron estudiados mediante técnicas de electroforesis, inmunoprecipitación e inmunoblot con anticuerpos específicos para diversas formas de tau y contra APP. Se evaluaron las relaciones entre el estado cognitivo de los sujetos y los patrones electroforéticos de tau y APP. -. Resultados: Se demostró la presencia de formas de tau plaquetaria con diverso patrón de migración en electroforesis. Las formas de tau de alto peso se encuentran en una significativa mayor proporción en pacientes con EA (p = 0,001), existiendo una correlación entre la expresión de tau de alto peso molecular y el grado de deterioro cognitivo de los pacientes. Por otra parte, el análisis de APP plaquetario no mostró diferencias significativas entre pacientes y controles, ni tampoco una relación con la expresión de la tau plaquetaria. -. Conclusiones: Hemos confirmado la presencia de proteína tau en plaquetas de sujetos controles y portadores de EA. El patrón electroforético de tau plaquetaria es compatible con la presencia de agregados de alto peso molecular y oligómeros de tau. Estas formas de alto peso de tau plaquetaria se encuentran significativamente aumentadas en relación a las formas monoméricas de tau en pacientes portadores de EA, existiendo una relación directa entre el grado de alteración del patrón electroforético de tau y el grado de deterioro cognitivo de los pacientes evaluados. No se encontró una relación entre el patrón electroforético de APP en plaquetas y el estado cognitivo de los sujetos, así como tampoco se evidenció una relación significativa entre alteraciones en el metabolismo de APP y las formas de tau plaquetaria.

Background: Alzheimer’s disease (AD) is the most important form of dementia in the world population. The expression of amyloid precursor peptide (APP) in platelets has been postulated as a reliable biochemical marker for AD. Preliminary research done in our laboratory has shown that tau protein is also present in platelets and there are several tau fractions that can be resolved in electrophoresis. It has been suggested that tau fractions are altered in AD patients in an age independent manner. The present thesis aims to evaluate platelets tau fractions as a suitable biomarker for AD. -. Methods: Peripheral blood samples were obtained from 47 AD patients and 19 control subjects. Platelets were isolated and the tau patterns evaluated by immunofluorescence. Platelets proteins were analyzed by electrophoresis, immunoprecipitation and immunoblot techniques with tau and APP specific antibodies. The relationships between cognitive performance and platelets tau and APP expression in blood samples of subjects incorporated into the study were evaluated. -. Results: Platelets tau electrophoretic pattern showed the presence of different tau fractions. A higher ratio of high molecular weight forms and oligomers of tau was found in AD patients, with a direct correlation between platelets tau pattern and cognitive impairment. On the other hand, the analysis of platelets APP failed to demonstrate differences between controls and AD patients. -. Conclusions: We have confirmed the presence of tau protein in platelets of AD and control subjects. The electrophoretic pattern of platelets tau is compatible with the presence of high molecular weight aggregated forms of tau, which are increased in relation to other forms of tau in AD patients. There is a direct relationship between degree of the alterations in tau forms ratio and the degree of cognitive impairment of the subjects. No relationship was found between platelets APP electrophoretic pattern and cognitive status, or between APP pattern and tau forms ratio.