Rol de sulfatidos en el transporte de Na+ y K+ A través de membranas biológicas.

Abstract

Una preparación de arilsuffatasa ha sido purificada a.Lrededor de 17O0 veces con eI objetivo de hidro.Iizar suffátidos (componentes de membrana plasmátíca ) sin perturbar eL r".to d" Ia matriz .l_ipÍdica. Etsta preparación no presenta contalninación de fosfolipasas o de proteasas. Fracciones microsomal-es tratadas con desoxicolato de sodio con el- objeto de aumentar l"a ac tividad especÍfica de (Na++t<' )A1,I,asa, han sido incubadas en presencia de arilsulfatasa obteniéndose un 95% de inhibición de l-a actividad A'fPásica sensib.l-e a uabaf na. Resul-tados obtenidos incubando ari I sulfatasa con ATPasa de piel y branc.uias de rana(34) presentaban una inhibj.ción semejante, obteniéndose en eI presente trabajo una confirmación de que e1 sulfátido es esenci-al oara La mantención cle -La acti vidad catalftica de (Na++x+ )ATpasa. Ana.l-izando el flujo activo de soclio en piel abdominaf de rana en diferentes estados de desarroffo larval, se ha encontrado gue aquelLos esta dos que presentan bajo contenido de sultátidos no presentan transporte activo de sodio, y que en esta dos intermedios de desarro.Ll-o larva.l- que presentan 3. mayor contenido de sulfátidos (23), comienza a esta blecerse eI transporte activo de sodio. En .l"os esta dos más avanzados, que presentan más contenido de sulfátidos que los estados anteriores. el transporte activo de sodio aumenta más de 3() veces en re.Iación a l"os estados intermedios " llstos result-arlos seiia l-an que' hay una estrecha correlac.ión ent-re eI flujo activo de sodio y r.1 contenido de suffátidos y que Ia piel abdominal es f i siológicamente activa soLo cuan do presenta un el-evado contenido de suffátidos" Finalmente, se ha demostrado que el- trata miento de glóbu1os rojos con arilsulfatasa provoca una inhibición del flujo de safida de sodio, similar a Ia inhibición que se obtiene cuando l-os q.Lóbu los rojos son incubados en un medio libre de potasio. Lo anterior sugiere que por efecto de la arifsulfatasa, los sitios externos de afinidad por potasj-o han sido eliminados y como la actividad catalftica de arilsulfatasa es específica para sultátidos, se puede concJ.uír que los sulfátidos son fos sitios ex ternos de afinidad por potasio c¡ue Dosee 1a bomba de sodio . También se puede concfufr gue los sul-fátidos están localizados en fa monocapa externa de fa membrana de glóbufos rojos, ya que de otro modo se- L rfan inaccesibfes para Ia ariLsulfatasa. En resumen, se han dado nucvas pruebas pa ra sostener 1a hipótesis que J-os sul-f átidos forman parte del mecanismo de La bomba cle sodio.

A quantitatj.ve reLation between the concentration of sulphatides and the activity of sodium-potassj.um dependent adenosine triphosphatase, has been shown in bovine kidney medulla, rectal gland of spiny dogfish, salt gland of herring gull and in human erythrocyte. It has been shor¿n that the specific en:ymatic hidrolysis of suj-phatide with ary.Lsulfátáse Ínhibits 10O % of the ouabain sensitive (Na++K+ )Atpase. In the present work, it is shown that sutphatide content in abdomina.l skin of tadpol-es is in direct relation with the leveL of sodium ffux. Finally, sodium efflux has been studied in 22Na l"oaded red blood ce.l-ls in the presence of arylsulfatase. Sodium efflux was inhibited proporcionally to the present amount of aryfsuLfatase. and the maximun effLux inhibition was almost as high as the ef f l-ux found in the absence of potassium in the medium. The resuLts point out a specific role of sulphatide in the sodium and potassi-um ion transpor! and also suggest an externaL localization of sulphatide in plasma membranes.