Caracterización funcional de la proteína factor acelerador del decaimiento de tripomastigotes de trypanosoma cruzi recombinante (sT-DAF)

Abstract

RESUMEN

Trypanosoma cruzi es un parásito protozoario y es el agente causal de la enfermedad de Chagas. Su ciclo de vida, transcurre entre un vector invertebrado y un hospedero vertebrado. Dentro de este último, T. cruzi se convierte en un blanco del sistema de complemento, el cual es parte de la inmunidad innata y cuenta con tres vías de activación; la vía clásica, alterna y de las lectinas. Los tripomastigotes de T. cruzi son altamente resistentes a la acción del complemento, no así otros estadios, como los epimastigotes, que son lisados. Esta resistencia se debe a diferentes proteínas presentes en tripomastigotes, que tienen acción reguladora del complemento. Entre estas se encuentra la proteína T-DAF la cual es capaz de inhibir la acción del complemento, en sus tres vías de activación, al evitar la formación y acelerar el decaimiento de las convertasas de C3 del complemento. En una Memoria de Título anterior se generó una proteína T-DAF recombinante, pero de menor tamaño molecular que fue denominada sT-DAF, la cual no fue caracterizada funcionalmente. En esta Memoria se produjo esta misma proteína en condiciones nativas de purificación por medio de bacterias E. coli. Realizando un ensayo de inhibición de la lisis mediada por el complemento en epimastigotes, se logró determinar una acción inhibidora del complemento por parte de sT-DAF, al aumentar la supervivencia parasitaria de epimastigotes enfrentados a suero normal humano como fuente del complemento. Queda pendiente evaluar este rol inhibidor en cada una de las vías de activación del complemento. Sin embargo, estos resultados son interesantes, considerando las importantes diferencias que existen entre sT-DAF y la proteína T-DAF original, y considerando las desventajas al utilizar procariontes como fuentes de proteínas recombinantes de eucariontes, debido a las modificaciones postraduccionales, la actividad de sT-DAF era cuestionable. Por ser altamente antigénica, T-DAF puede ser un blanco de diagnóstico y terapéutico, por lo tanto, contar con una proteína recombinante puede facilitar futuros estudios enfocados en esa dirección y permitir el entendimiento sobre otras proteínas reguladoras del complemento de T. cruzi.

ABSTRACT

Trypanosoma cruzi is a protozoan parasite and it is the causative agent of Chagas disease. In its life cycle participates an invertebrate vector and a vertebrate host. Within the latter, T. cruzi becomes a target of the complement system, which is part of innate immunity and has three activation pathways; the classical, alternate and lectin pathway. Trypomastigotes of T. cruzi are highly resistant to the action of complement, but another stages, such as epimastigotes, are lysed. This resistance is due to different proteins present in trypomastigotes, which have a complement regulatory action. Among these, it is the protein T-DAF which is capable to inhibit the action of complement in its three activation pathways by preventing the formation and accelerating the decay of C3 convertases of complement system. In a previous Undergraduate Thesis, a recombinant T-DAF protein was generated, but with a smaller molecular size, which was called sT-DAF. However, this small protein was not functionally characterized. In this Undergraduate Thesis, this protein was produced under native conditions of purification by means of E. coli bacteria. Carrying out a complement-mediated lysis inhibition test in epymastigotes, it was possible to determine a complement inhibitory action of sT-DAF by increasing the parasitic survival of epimastigotes confronted with normal human serum as a source of complement. It remains to evaluate this inhibitory role in each of complement activation pathways. However, these results are interesting considering the important differences detected between sT-DAF and the original T-DAF protein, and considering the disadvantages when using prokaryotes as sources of recombinant eukaryotic proteins, due to post-translational modifications, the activity of sT-DAF was questionable. Because T-DAF is highly antigenic, it can be a diagnostic and therapeutic target, therefore, a recombinant protein can facilitate future studies focused in to understand T. cruzi complement regulatory proteins. Keywords: Trypanosoma cruzi, complement, recombinant protein, T-DAF, regulation.