Rol de la oncoproteína E7 de virus papiloma humano tipo 16 y de la vía EGFR/MAPK-PI3K en la activación de PIR/NF-κB en células orales humanas

Abstract

El virus papiloma humano (VPH) está involucrado en el desarrollo de cáncer cervical, cabeza y cuello y anogenital. VPH16 es el tipo viral asociado a un mayor número de casos de cáncer. El cáncer de la cavidad oral es un tipo de cáncer de cabeza y cuello en el cual VPH16 ha sido detectado en un subgrupo de casos y se caracteriza por alta frecuencia de metástasis regionales. Se ha sugerido que VPH está involucrado en la regulación de la vía del factor nuclear potenciador de las cadenas ligeras kappa de células B activadas (NF-κB) para inducir un fenotipo metastásico, aunque no es clara su función durante la progresión tumoral. Previamente, hemos encontrado que la oncoproteína E7 de VPH16 promueve un incremento de los niveles de la proteína Pirin, codificada por el gen PIR y que funciona como un regulador de NF-κB. Además, la proteína Pirin es asociada a progresión tumoral debido a que regula positivamente la transición epitelial-mesenquimal (TEM) y la migración de células tumorales. Por lo mencionado anteriormente, en esta tesis se propuso como hipótesis que ‘’La oncoproteína E7 de VPH16 promueve la activación de la vía PIR/NF-κB a través de la señalización EGFR/MAPK-PI3K en células orales humanas’’ y el objetivo general fue analizar la activación de PIR/NF-κB por la oncoproteína E7 de VPH16 y mediada por la vía de señalización EGFR/MAPK-PI3K en células orales humanas. Los resultados obtenidos indican que E7 induce un incremento en los niveles de transcritos de PIR a través de la activación de su promotor, mediado por el reclutamiento de NRF2, lo cual se traduce en un aumento significativo de los niveles de la proteína Pirin. Además, se determinó que el incremento de E7 y Pirin promueve la activación de la vía NF-κB. Mediante una aproximación proteómica, se observó regulación positiva de diversas

proteínas relacionadas con la señalización de NF-κB. Dentro de ellas, IRF5, IRF8, p- P65S529, C-REL (proteínas relacionada con activación) e IkB (proteína de auto

regulación NF-κB) fueron reguladas positivamente. Del mismo modo, se observó que la vía EGFR/PI3K/AKT1 es en gran parte la responsable de la regulación de PIR/NF-κB inducida por E7 de VPH16. Esta tesis permite concluir que E7 induce activación de la vía EGFR/PI3K/AKT1/NRF2 lo cual a su vez lleva a activación de PIR/NF-κB promoviendo la migración de células tumorales epiteliales orales.

Human papillomavirus (HPV) is involved in the development of cervical, head and neck, and anogenital cancers. HPV16 is the viral type associated with the highest number of cancer cases. Oral cavity cancer is a type of head and neck cancer in which HPV16 has been detected in a subset of cases and is characterized by a high frequency of regional metastasis. HPV has been suggested to be involved in the regulation of the activated B cell kappa light chain enhancer nuclear factor pathway (NF-κB) to induce a metastatic phenotype, although its role during tumor progression is unclear. Previously, we have found that the HPV16 E7 oncoprotein promotes increased levels of the Pirin protein, encoded by the PIR gene, which functions as a regulator of NF-κB. Furthermore, the Pirin protein is associated with tumor progression because it positively regulates epithelial-mesenchymal transition (EMT) and tumor cell migration. In this Thesis, we hypothesized that "HPV16 E7 oncoprotein promotes activation of the PIR/NF-κB pathway through EGFR/MAPK-PI3K signaling in human oral cells" and the general goal was to analyze the activation of PIR/NF-κB by the HPV16 E7 oncoprotein and mediated by the EGFR/MAPK-PI3K signaling pathway in human oral cells. The results obtained indicate that E7 induces an increase in the levels of PIR transcripts through the activation of its promoter, mediated by the recruitment of NRF2, which translates into a significant increase in the levels of the Pirin protein. In addition, the increase in E7 and Pirin promotes activation of the NF-κB pathway. Using a proteomic approach, we observed positive regulation of various proteins related to NF-κB signaling. Among

these, IRF5, IRF8, p-P65S529, C-REL (activation-related proteins) and IkB (NF-κB self- regulating protein) were upregulated. Similarly, we observed that the

EGFR/PI3K/AKT1 pathway is largely responsible for the regulation of PIR/NF-κB induced by HPV16 E7. This thesis allows us to conclude that E7 induces activation of the EGFR/PI3K/AKT1/NRF2 pathway, which in turn leads to activation of PIR/NF-κB, promoting the migration of oral epithelial tumor cells.