Efecto de PGE2 en la activación de la GTPasa pequeña Rab5 y en la internalización de E-cadherina en células HT29 de adenocarcinoma colorrectal

Abstract

Introducción: Prostaglandina E2 (PGE2) es un lípido que ejerce una serie de funciones biológicas y ha sido implicada en distintos aspectos de la progresión tumoral. La pérdida de la molécula de adhesión epitelial E-cadherina es considerada un paso clave durante la progresión tumoral de varios tipos de carcinomas, sin embargo, no se sabe si PGE2 es capaz de inducir la endocitosis de ésta y con ello su pérdida temprana en la membrana plasmática. Por otra parte, la GTPasa pequeña Rab5, es el regulador maestro de la endocitosis temprana y su sobre-activación se ha visto implicada en la progresión tumoral. Sin embargo, el efecto de la PGE2 en la activación de Rab5 no ha sido descrito, así como tampoco la participación de Rab5 en la endocitosis de E-cadherina. Hipótesis: Prostaglandina E2 induce la activación de Rab5 y con ello la internalización de E-cadherina en células de adenocarcinoma colorrectal HT29(ATCC) y su variante altamente invasiva HT29(US). Metodología: Células HT29(ATCC) de adenocarcinoma colorrectal, fueron estimuladas con PGE2 y se evaluó la activación de Rab5 mediante las técnicas de pulldown e inmunofluorescencia. También se determinó el receptor de PGE2 involucrado en estas

respuestas, mediante el uso de antagonistas farmacológicos. La internalización de E- cadherina inducida por PGE2 fue evaluada por inmunofluorescencia y pruebas de co- localización con el marcador de endosomas tempranos EEA1. Finalmente se evaluó el nivel

de activación de Rab5 y la expresión de E-cadherina en la sub-línea celular HT29(US), derivada de células HT29(ATCC), pero con características más invasivas, determinándose además el posible rol de PGE2 y Rab5 sobre este estado. Resultados: PGE2 induce la activación de Rab5, principalmente mediante el receptor EP2, y además, induce la internalización de E-cadherina hacia compartimientos EEA1 positivos, los cuales son dependientes de la función de Rab5. Además, se observó que las células HT29(US) presentan basalmente un mayor nivel de activación de Rab5 que depende de la activación del receptor EP2, así como una menor expresión de E-cadherina, la cual aumenta al silenciar la expresión de Rab5 mediante shRNA. Conclusiones: En este estudio se propone un nuevo mecanismo por el cual PGE2 podría estar participando en la progresión tumoral. Esto es, la activación de la GTPasa pequeña Rab5, y la internalización de E-cadherina, ambos procesos necesarios para la adquisición de un fenotipo celular migratorio e invasivo durante la progresión tumoral de carcinomas, lo cual se refleja en la sub-línea celular HT29(US), la cual presenta más Rab5 en estado activo, menos E-cadherina, y son más invasivas que las células HT29(ATCC).