Utilización de células dendríticas para la obtención de anticuerpos monoclonales contra proteínas poco inmunogénicas

Abstract

Las células dendríticas (DC) son consideradas centrales en la respuesta inmune ya que son las únicas capaces de act¡var células T virgenes e iniciar una respuesta inmune pr¡maria. Las células presentadoras de antfgeno (APC) más eficientes del sistema inmune son las DC, las cuales se espec¡alizan en capturar y procesar antígenos para luego presentarlos, en los órganos linfoides secundarios, a los linfocitos T (LT). Un grupo de estos LT (LT CD4) tiene un rol fundamental en la respuesta inmune humoral ya que su interacción con los linfocitos B (LB) desencadena la producción de ant¡cuerpos. Estas características de las DC han hecho que sean usadas para generar inmunidad específica contra melanomas, infecc¡ones virales y como co-adyuvantes m vivo para producir activación específica de linfocitos T y B. En esta tesis se utilizaron CDs para aumentar la respuesta inmune mediada por células B contra una proteína poco inmunogénica. Para esto se eligió una proteína en estudio en e¡ laboratorio y que es de gran relevancra en el contexto del s¡stema inmune, CllTA, el transactivador del comple¡o principal de histocompatibilidad de clase ll (MHC ll), proteína contra la cual ha sido extremadamente difícil producir ant¡cuerpos. Los resultados obtenidos muestran que al comparar distintos protocolos de inmunización, sólo las CDs cargadas in vitro con la proteína recomb¡nante son capaces de producir un alto título de anticuerpos contra CllTA. Además, aunque al realizar fusiones para generar anticuerpos monoclonales siempre se obtuvieron hibridomas, ¡ndependiente del sistema utilizado para inmunizar los ratones, sólo la inmunización con CDs generó hibridomas productores de anticuerpos que reconocen la proteína otTA. tx En base a estos datos se plantea la utllización de DC como adyuvante para una inmunización eficaz en la producción de anticuerpos monoclonales contra antígenos poco inmunogénicos.

Dendritic cells (DCs) are central in the immune response since they are the only cells able to activate naive T cells and to elic¡t a primary immune response. As the most potent antigen presenting cells (APC) in the immune system, DCs specialize in the capture and processing of antigens that will be presented to T lymphocytes (LT) as immunogenic peptides in secondary lympho¡d organs. A group of these activated LT (LT CD4) have a fundamental role in the humoral immune response through their interaction with B lymphocytes (LB) to unchain the production of antibodies. For their function in the immune system, DCs have been used to generate specif¡c immunity against melanomas and viral infections and as adjuvants for the specific activation T and B lymphocytes rn uiuo. This thesis shows that through the use of DCs one can increase the immune response med¡ated by B cells against a poor immunogen¡c prote¡n. W¡ih th¡s purpose, we chose a protein presently in study in the laboratory that ¡s highly relevant in the context of the immune system, CllTA, the transact¡vator of the main histocompatibility complex of class ll (MHC ll). The results show that among the different immunization protocols used, only the use of DCs loaded with the immunogen in vitro are able to produce a high title of antibodies aga¡nst CllTA, Also, although all fus¡ons generated hybridromas irrespectively of the immunization protocol, only the immunization with DCs generated hybridomas producing antibodies capable of recogn¡zing the CIITA prote¡n. Based on these data we propose the use of DCs as a method for effect¡ve immunization for the product¡on of monoclonal antibodies against poor immunogenic antigens.