Estudio de la familia de canales de cloruro activados por calcio CICa en neuronas olfatorias de ratas

Abstract

Los canales de Cl- activados por Ci* son un importante componente de la transducción olfatoria en vertebrados (Lowe and Gold, 1993). El odorante se une a un receptor ubicado en los cilios de las neuronas sensoriales olfatorias §SOs), que forman parte del epitelio olfatorio (EO). Esta unión conlleva al incremento de iones Ca2* en el espacio intraciliar, los cuales ingresan a través de canales gatillados por nucleótidos ciclicos (CNG). Los iones Ca2* activan canales de Cl- a través de los cuales sale este ión, contribuyendo a la amplificación de la despolarización en las NSOs (Kleene and Gesteland, 1991). Sin embargo, la identidad molecular de este canal de Cl- activado por Ca2* aún no ha sido elucidada. Con miras a la identificación molecular de este canal, en el presente trabajo analizamos la expresión, en epitelio olfatorio de ruta, de 3 tipos de canales de Cl- activados por Ca2*, los que llamamos en su conjunto PanClCa (rClCal, rbClCal y rbClCa2), todos pertenecientes a la familia ClCa. Utilizando la técnica de RT-PCR anidado y a través de un análisis de secuenciación, encontramos que el canal que se expresa en epitelio olfatorio de rata corresponde a rbClCa2. Por otro lado, encontramos que el canal Cl- activado por Ca2* perteneciente a la familia de las bestrofinas, mflest2, expresado en EO y en NSO de ratón (Pifferi et a1.,2006), no se expresa en EO de rata y que el canal rbClCa2 expresado en EO de rata no se expresa en EO de ratón. Estos resultados nos sugieren que 1a expresión de canales de Cl- activados por Ca2* en EO de Éta y ratón es especie específica

The Ca2t-activated Cl- channel is an important component of olfactory transduction (Lowe and Gold, 1993). Odor binding to olfactory receptor in the cilia of OSNs leads to an increase of intra ciliary Cit concentration by CNG channels. Ctt-activaied C1- cha¡nel allow the efflux of Cl- ion from the cilia, contributing to the OSNs depolarization (Kleene and Gesteland, 1991; Reisert et al., 2003). However, the molecular identity of this charmel has not been established. Here we analyzed the expression, in rat olfactory epithelium, of3 Cl- channels belonging to üe "ClCa" family: rClCal, rbClCal y rbClCa2 (PanClCa). Using Nested RT-PCR and sequencing techniques, we found that the Ca2*-activated Cl- cha¡nel expressed in OE ofrat corresponds to rbClCa2. In contrast and surprisingly, the Ca2*-activated Cl- channel "Bestrophin-2", proposed to be present in mouse OSNs (Pifferi et a1.,2006), is absent in rat; and PanClCa present in OE of rat is absent in mouse, as indicated by nested RT-PCR rat olfactory epithelium. This result indicates that the expression of Ca2* activated Cl- channels is species-specific in rat and mouse OE.