Caracterización funcional de la región troncal de la proteína Gc del hantavirus andes

Abstract

Los hantavirus son virus envueltos, con un genoma tripartito de RNA monohebra sentido negativo que infectan humanos. En Chile, desde el año 1995 se ha descrito la presencia de la especie de hantavirus: Andes (ANDV). En su membrana de envoltura se encuentra anclada la glicoproteína Gc, la cual es la encargada de fusionar la membrana viral con la membrana celular, proceso que permite, la entrada de las ribonucleocápsides virales al citoplasma celular. Gc comparte características con proteínas de fusión clase II, las cuales poseen un gran ectodominio amino-terminal y están ancladas a la membrana viral por un segmento transmembrana. La región troncal corresponde a la región que comunica el ectodominio con el segmento transmembrana. Estudios previos identificaron que ésta corresponde a una región de 44 residuos altamente conservada dentro del género Hantavirus. La caracterización de la región troncal de ANDV-Gc indició que posee un alto contenido a helicoidal y que además interactua con membranas modelos. Cómo continuación, en este trabajo se planteó determinar cuáles son los lípidos necesarios para la interacción de la región troncal de la proteína Gc del virus Andes con membranas. También, se analizó mediante mutagénesis, si esta región es esencial dentro del proceso de fusión de membranas. Usando un ensayo de coflotación de péptidos análogos de la región troncal con liposomas, se encontró que sólo fosfatidilcolina es requerida para la interacción de la región troncal con membranas. Por otra parte, diferentes mutantes de la región troncal de fueron introducidas en la proteína Gc de ANDV, su expresión y transporte a la membrana plasmática corroborada y su actividad fusogénica analizada en nn ensayo de fusión célula - célula. La mutante que carece de esta región, así como la mutante L414E, perdieron dicha actividad, indicando que esta región es esencial dentro del proceso de fusión de membranas. No se logró detectar síntesis de la mutante Gc W441E. la Cómo continuación de esta tesis se plantea el generar un mayor número de sustituciones en la región troncal y determinar en que etapa dentro del proceso de fusión de membranas las mutantes pierden la actividad. Estos estudios permitirán determinar residuos esenciales dentro de esta región y la función de ésta en el proceso de fusión de membranas.