Función del extremo C-terminal de la proteina TonB en la sensibilidad a la microcina E492

Abstract

La microcina E492 es una bacteriocina que forma canales iónicos en la membrana citoplasmática de las células sensibles, e in vitro en membranas artificiales. Los determinantes genéticos necesarios para su producción, presentes en un segmento de 13 kb en el genoma de Klebsiella pneumoniae cepa RYC492, fueron clonados y expresados en Escherichia coli, obteniéndose una microcina recombinante de idénticas propiedades bioquímicas y biologicas. El mecanismo de accion de esta microcina involucra traspasar la membrana externa por medio de la interaccion con los receptores de sidereforos catecolicos FepA, Flu y Cir. La insercion de la microcina E492 en la membrana citoplasmática produciría su despolarización y seria un proceso dependiente de la proteína de membrana citoplasmática TonB. En este trabajo se genero una construccion que codifica para una proteína TonB trunca que carece del extremo C-terminal (TohBA109-239) para averiguar su participacion en ]a actividad bactericida de la microcina E492. Una cepa que expresa esta proteína trunca es insensible a la microcina E492 y conserva esta resistencia en células cuya membrana externa ha sido permeabilizada (esferoplastos), lo cual permite concluir que se requiere del extremo C-terminal de TonB para la actividad bactericida de MccE492. Para ejercer su accion fisiologica, Ia proteína tonB se asocia con 2 proteínas de la membrana interna: ExbB y- ExbD. En este trabajo se analizo si ExbB es importante para la accion de la proteína de la inmunidad. Una cepa mutante ExbB presenta un fenotipo parcialmente sensible a la microcina E492, indicando que se requiere del funcionamiento de TonB para el ingreso de la microcina E492 al espacio periplasmatico. Sin embargo, Ios esferoplastos de las celulas mutantes en ExbB que expresan la proteína de la inmunidad MceB son completamente inmunes a la microcina E492, indicando que ExbB es dispensable en el mecanismo de inmunidad