Generación ex vivo de células dendríticas humanas para el procesamiento y presentación natural de péptidos autoantigénicos, a través de moléculas del antígeno leucocitario humano (HLA) de clase I, provenientes de fluido sinovial de pacientes con artritis reumatoide

Abstract

La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad autoinmune que se genera por la presentación de autoantígenos por parte de las células dendríticas (DCs) a linfocitos T (LT) CD4+, las cuales mediante una cascada de reacciones inducirán activación celular y humoral, perpetuando el daño por el reconocimiento de autoantígenos presentes en las articulaciones a través de la presentación de moléculas del antígeno leucocitario humano (HLA) de clase II. Actualmente, el enfoque de estudio de la etiopatogenia de la AR involucra a los LT CD4+ y la presentación de autoantígenos a través de moléculas HLA de clase II. Sin embargo, evidencia reciente sumaría la participación de los LT CD8+. Este proyecto de tesis se enfocó en los objetivos de la generación de DCs a partir de monocitos de sangre periférica de sujetos sanos (SS), la pulsación con fluido sinovial (FS) de pacientes con AR y el aislamiento e identificación de los péptidos presentes en la hendidura de las moléculas HLA de clase I. Con este fin, se generaron DCs pulsadas con FS de pacientes con AR, que posteriormente serían lisadas para aislar los complejos péptidos/HLA asociados a la AR, desde los cuales se eluirían los péptidos que serían analizados mediante espectrometría de masas, siendo asignada su identidad utilizando el algoritmo SEQUEST. Los resultados indican que se logró generar DCs con fenotipo inmaduro (iDCs) y maduro (mDCs) a partir de monocitos de sangre de SS. Se observaron cambios morfológicos y diferencias en la expresión de marcadores de superficie CD86, CD40, HLA-I y HLA-II entre iDCs y mDCs. Además, se utilizó el FS de pacientes con AR, depletado de albúmina sérica humana (HSA), para pulsar las DCs, que resultó en un aumento en la expresión de marcadores de superficie tanto en las mDCs pulsadas con FS (FSd-DCs) como en las mDCs sin pulsar (SP-DCs), respecto de las iDCs. Sin embargo, el objetivo de aislar y caracterizar los péptidos de los complejos HLA de clase I desde las FSd-DCs no pudo ser alcanzado por falta de tiempo en la ejecución de esta tesis. En conclusión, los resultados respaldan parcialmente la hipótesis y sugieren que las DCs pueden procesar péptidos autoantigénicos al ser pulsadas con FS de pacientes con AR. No obstante, la identificación de los péptidos específicos en los complejos HLA de clase I requerirá futuras investigaciones y mejoras en el enfoque experimental.