Participación de p35, activador neuroespecífico de cdk5, en la muerte celular inducida por el péptido beta amieloide : aspectos celulares y moleculares

Abstract

La enfermedad de Alzheimer CIA) es un desorden neurodegenerativo que se caracteriza por dos tipos de agregados proteicos: extracelulares (lacas seniles) e intracelulares (ovillos neurofibrilares, ONF). Los ONF están formados principalmente por la proteína tau hiperforforilada. Varias quinasas pueden fosforilar tau, incluyendo Gsk3P, MAP quinasa, la proteína quinasa A y la quinasa dependiente de ciclina 5 (cdk5). Se ha postulado que la desregulacion de cdk5 seria un evento determinante en la hiperfosforilacion de tau en la EA. cdk5 se asocia con la proteína p35, expresada predominantemente en neuronas, por lo que la mayor actividad de cdk5 esta concentrada en sistema nervioso. La sobreexpresi6n de p25 (fragmento proteolitico de p35) en varios modelos de ratones transg6nicos produce un aumento en la actividad de cdk5 que conlleva hiperfosforilaci6n de tau, muerte neuronal y astrogliosis. Con estas evidencias de la participaci6n del complejo cdk5/p35 en procesos de neurodegeneracion como la EA, se gener6 un modelo de rat6n transgénico condicional para expresar la proteína p35 en cerebro de manera regulable con el sistema de expresion genica dependiente de tetraciclina (Tet)., Para ello se genero el vector BiTeto-p35AIGFP y se analizo la expresi6n y la regulaci6n de este transg6n en c6lulas N2A-tTA. Posteriormente, se obtuvieron 4 lineas de animales transgenicos fundadores q3, L5, L7 y L9) que transportan el transgen. Estos animales fueron cruzados con animales que sobre expresan tTA en el sistema nervioso central obteni6ndose animales dobles transg6nicos a3iTeto-p35flGFP y tTA). Mediante wesfer7e bJof se determino que no hubo sobreexpresion de p35 ni expresi6n de EGFP en todos los animales dobles transgenicos analizados. Posiblemente debido a una inactivacion y un posterior silenciamiento de los transgenes. Por ello, estudios desarrollados en cultivos primarios de neuronas mostraron que, neuronas transfectadas con BiTeto-p35AIGFP y tTA en presencia de Api.42 presentaron mayor susceptibilidad a la neurotoxicidad inducida por el amiloide. El mecanismo de acción del péptido involucran'a la activacion de vías apopteticas puesto que se determino que la mayoría de las neuronas transfectadas que sobreexpresaban p35 eran positivas para caspasa 3 activada. Ademas, se determino que en neuronas hipocampales la reversion de la sobreexpresion de p35 con tetraciclina revirtio en parte la muerte de las neuronas por apoptesis. Estos resultados demuestran la participacion del complejo cdk5/p35 y un posible sinergismo con la via amieloidogenica en la induccion de apoptosis en neuronas hipocampales