Análisis morfométrico para la determinación del efecto citopático de aislados clínicos de escherichia coli productora de colibactina (CoPEC) sobre células hela
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2022Metadata
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Toledo, Jorge
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Análisis morfométrico para la determinación del efecto citopático de aislados clínicos de escherichia coli productora de colibactina (CoPEC) sobre células hela
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Escherichia coli es una bacteria de la familia Enterobacteriaceae, que forma parte de la microbiota
intestinal humana y que, por otro lado, es agente causal de infecciones del tracto gastrointestinal y
urinario. Dentro de la especie E. coli existe una amplia variedad de cepas, las que, de acuerdo a las
metodologías más actualizadas, pueden ser clasificadas en filogrupos y secuenciotipos. Dentro del
filogrupo B2, el cual incluye principalmente cepas patogénicas extraintestinales de E.coli, es donde
encontramos a las E. coli productoras de colibactina (CoPEC), cuya prevalencia ha ido en aumento en
la población mundial. Las cepas CoPEC poseen la isla de patogenicidad pks (polyketide synthase) en su
genoma, que codifica la maquinaria de síntesis de la toxina colibactina, un compuesto híbrido entre
policétido y péptido de síntesis no ribosomal. Mediante análisis de microscopía, se ha visto que
infecciones transientes con CoPEC inducen megalocitosis en células eucariotas, caracterizada por el
aumento progresivo del tamaño celular y del núcleo. La inducción de megalocitosis ha sido
mayoritariamente observada utilizando cepas prototipo y no ha sido sistemáticamente determinada en
células infectadas con grupos de aislados clínicos que representen una mayor diversidad genética.
Además, no se han realizado análisis cuantitativos de las imágenes capturadas por microscopía, que
permitan determinar la magnitud de los efectos citopáticos ocasionados por distintas cepas CoPEC. Por
lo tanto, este trabajo tiene como objetivo evaluar la capacidad de distintos aislados clínicos de CoPEC
de ocasionar megalocitosis sobre células HeLa en tinciones de May-Grünwald Giemsa (MGG) y
mediante el uso de High Content Screening (HCS). Además, se cuantificaron y establecieron
diferencias en la magnitud del efecto citopático entre diferentes aislados, mediante el software Fiji. Se
observó que todos los aislados clínicos de cepas CoPEC presentaron la capacidad de inducir
megalocitosis, con diferencias significativas en su magnitud e independiente del secuenciotipo. De este
modo, la implementación de estas metodologías contribuirá a la caracterización de las capacidades
patogénicas que las cepas CoPEC exhiben in vitro, estableciendo una base para futuras evaluaciones
del rol de otro determinantes de patogenicidad, además de la colibactina, y la eficacia de potenciales
inhibidores.
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Tesis para optar al título profesional de Tecnólogo Médico con mención en Morfofisiopatología y Citodiagnóstico.
Identifier
URI: https://repositorio.uchile.cl/handle/2250/200819
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