Diversidad de especies y genotipos de bifidobacterium en saliva y caries de niños chilenos de 7 a 11 años de edad con y sin caries

Abstract

INTRODUCCIÓN: La cavidad oral posee una microbiota residente característica, la cual, en un estado de equilibrio, coexiste en armonía con el hospedero y es beneficiosa para el mismo. Esta homeostasis bacteriana puede verse alterada al ser perturbado el hábitat, provocando un desequilibrio de la microbiota residente, lo que induce al desarrollo de patógenos oportunistas que facilitan el progreso de la caries dental, que corresponde a un proceso patológico mediado por bacterias, de origen multifactorial, altamente prevalente y costoso de tratar. Entre estos patógenos, han sido descritas ciertas especies del género Bifidobacterium, las cuales corresponden a bacterias Gram positivo, anaerobias, con propiedades acidogénicas y acidúricas, polimórficamente ramificadas, no móviles y no formadoras de esporas. A la fecha no existen estudios publicados sobre la diversidad de especies y genotipos de Bifidobacterium spp. en la cavidad oral de niños, ni de su asociación con caries. OBJETIVO: Analizar las diversidad de especies y genotipos de Bifidobacterium, en saliva y caries dentinaria de niños chilenos de 7 a 11 años de edad con caries y en saliva de niños libres de caries. MATERIAL Y MÉTODOS: Protocolo aprobado por el Comité de Ética de la Facultad de Odontología. Previo consentimiento de los padres, se tomaron muestras de saliva y caries a niños Chilenos de 7-11 años (9 sin caries y 9 con caries), en la Clínica Odontológica, Universidad de Chile. Las muestras fueron sembradas en el medio de cultivo Triptona - Fitona - Extracto de Levadura modificado (MTPY), selectivo para Bifidobacteriaceae, e incubadas 72 hrs a 37°C en anaerobiosis. De las colonias crecidas, se seleccionaron 16 al azar desde cada muestra, para aislamiento de ADN. A través de la realización de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) con oligonucleótidos específicos para Bifidobacteriaceae y oligonucleótidos específicos para amplificación de un fragmento de ADN del gen de 16S rRNA bacteriano, en los casos que no amplificaron con oligonucleótidos específicos para Bifidobacteriaceae. El producto de PCR fue purificado y posteriormente se secuenciaron e identificaron las

especies. Finalmente se diferenciaron los genotipos de las especies pertenecientes a la familia Bifidobacteriaceae, mediante PCR basado en secuencias repetitivas (REP-PCR) y se realizaron análisis estadísticos de los resultados. RESULTADOS: No se detectaron Bifidobacterium spp. en la cavidad oral de los sujetos de estudio, sin embargo se aislaron otras especies a partir del medio de cultivo MTPY. Actinomyces odontolyticus fue asociado a la saliva de los niños, independiente de su experiencia de caries. Rothia mucilaginosa se vio asociada a la cavidad oral de los sujetos libres de caries. Lactobacillus spp. se vio asociado a la cavidad oral de sujetos con experiencia de caries. Parascardovia denticolens estuvo fuertemente asociada a sitios de caries. CONCLUSIONES: No se logró validar ni refutar la hipótesis de trabajo del presente estudio, debido a que no fue posible aislar Bifidobacterium spp, desde las muestras de los sujetos participantes. Se encontró asociación entre algunas de las especies aisladas en este estudio, con la experiencia de caries de los sujetos y el tipo de muestra. Los aislados de Parascardovia denticolens presentaron una amplia variedad de genotipos, pero con un mismo origen filogenético.