Caracterización genotípica y fenotípica de las poblaciones de Botrytis cinerea predominantes en Actinidia deliciosa de un huerto de la VII Región

Abstract

Se estudió la dinámica poblacional de Botrytis cinerea (Bc) en el cultivo del kiwi en Chile, caracterizando genética y fenotípicamente un número representativo de aislados recuperados desde flores y frutos sintomáticos colectados en pre y poscosecha en un huerto del Valle Central. En total se seleccionaron completamente al azar 276 aislados monospóricos, determinándose la correspondencia genotípica mediante PCR-dúplex y el uso de partidores específicos (amplificación de secuencias transponibles Boty y Flipper). Posteriormente, 10 aislados de cada genotipo identificado se caracterizaron fenotípicamente con respecto a: 1) aspecto morfológico (miceliar/esclerocial), 2) capacidad formadora de esclerocios, 3) nivel de esporulación a 20ºC (Agar Malta) y 4) crecimiento miceliar a 15, 20 y 25ºC (agar malta); evaluándose además la virulencia de éstos mismos aislados en: a) bayas de vid cv. Thompson Seedless de 16,5º Brix de madurez, inoculadas con y sin herida y mantenidas en incubación a 20ºC por 96 horas (nº de bayas = 150/genotipo; 25 por repetición y condición) y b) en frutos de kiwi cv. Hayward (7-8º Brix) inoculados solo con heridas (nº de frutos = 100/genotipo; 25 por repetición), incubados a 20ºC y 0ºC por 17 y 60 días, respectivamente. Los resultados obtenidos señalan a vacuma como el genotipo predominante en floración (36%) y poscosecha (69.2%); transposa se presenta en menor proporción durante floración (20%), aumenta en cosecha (84%), y en poscosecha solo corresponde a un 7,7%. Los aislados tipo flipper, se presentaron en una baja a moderada frecuencia en todos los estadios fenológicos o periodos analizados, con excepción de fruto recién formado (24%); finalmente los aislados tipo boty solo se recuperaron en una alta proporción durante floración (32%), no detectándose en poscosecha. Estos resultados señalan que la composición de la población de Bc en kiwi difiere notoriamente de la descrita en uva de mesa de Chile, en la cual transposa predomina en todos los estadios fenológicos, y vacuma sólo se presenta en una muy baja proporción y casi exclusivamente en floración. Fenotípicamente, los aislados se comportaron de manera similar independientemente de la correspondencia genotípica (p > 0,05). En general, al evaluar la virulencia en bayas de vid a 20°C, los mayores diámetros de lesión en la condición con herida, fueron presentados por los aislados flipper (p < 0,05), pero sin diferencias con los demás genotipos en la modalidad sin herida (p > 0,05). En kiwis incubados a 20°C, aunque no se detectaron diferencias significativas entre aislados Bc de los distintos genotipos, vacuma fue el más virulento; en cambio a 0ºC, los aislados vacuma y boty fueron más agresivos diferenciándose significativamente de los aislados transposa y flipper (p < 0,05). Los resultados obtenidos permiten concluir la existencia de una posible asociación entre la composición genotípica de las poblaciones de Bc presentes en kiwi y el nivel de daño por pudriciones del patógeno en poscosecha.

The population dynamics of Botrytis cinerea (Bc) on a kiwifruit crop in Chile was studied by genetic and phenotypic characterization of a representative number of isolates from symptomatic flowers and fruits collected at pre- and postharvest in an orchard located in the Central Valley. In total, 279 randomly selected monosporic isolates were used, with the genotypic correspondence being determined by the duplex PCR reaction and the use of specific primers (amplification of transposable sequences Boty and Flipper). Later, 10 isolates of each identified genotype were phenotypically characterized with respect to: 1) morphological aspect (mycelial/sclerotical); 2) sclerotium-forming ability; 3) sporulation level at 20°C (malt agar); and 4) mycelial growth at 15, 20 and 25°C (malt agar). In addition, the virulence of the same isolates was evaluated in: a) ‘Thompson Seedless’ grape berries having 16,5°Brix of maturity, inoculated with and without wound and kept under incubation at 20°C for 96 hours (N° of berries = 150/genotype; 25 per replication and condition); and b) ‘Hayward’ kiwifruits (7-8°Brix) inoculated just with wounds (N° of fruits = 100/genotype; 25 per replication), incubated at 20 and 0°C for 17 and 60 days, respectively. The results obtained show vacuma as the predominat genotype (69.2%); transposa occured in a smaller proportion during bloom (20%), it increased at harvest time (84%), and at postharvest it only reached 7.7%. Flipper-type isolates occurred in a low-to-moderate frequency at all the phonological stages or periods analyzed, excepting newly-formed fruit (24%), while boty-type isolates were recovered in high proportion only during bloom (32%), not being detected at postharvest. These results indicate that B. cinerea population make-up differs markedly from that described in table grapes in Chile where transposa prevails at all the phenological stages, and vacuma occurs just in a very low proportion and almost exclusively at bloom. Phenotypically, the isolates behaved similarly irrespective of the genotypic correspondence (p >0.05). When evaluating the virulence, the greatest lesion diameters in wounded grape berries were shown by flipper isolates (p <0.05), but with no differences with the other genotypes in the unwounded group (p >0.05). In kiwifruit incubated at 20°C, although no significant differences were detected among Bc isolates of the different genotypes, vacuma was always the most virulent; conversely, at 0°C vacuma and boty isolate were more aggressive and differentiated significantly from the transposa and flipper isolates (p< 0.05). The results obtained suggest the existence of a possible association between the genotypic composition of Bc populations occurring in kiwifruit and the level of damage from rots caused by the pathogen at postharvest.