Polimorfismo G-699C en la región promotora del receptor B1 de bradikinina y tos inducida por enalapril

Abstract

Las enfermedades cardiovasculares son la primera causa de morbilidad y mortalidad en Chile. Según un estudio de morbilidad percibida del país, la hipertensión arterial (HTA) ocupa el primer lugar de causa de consulta a nivel primario, con una prevalencia de un 15%. Los inhibidores de la enzima convertidora de angiotensina (IECAs), como el enalapril, son un grupo de fármacos ampliamente utilizados para el control de la HTA. Por un lado impiden la conversión de angiotensina I en el péptido vasoactivo angiotensina II y por otro producen acumulación de BK, al impedir su degradación. Como otros medicamentos, los IECAs presentan reacciones adversas que pueden limitar su uso, entre estas reacciones se encuentra la tos y el angioedema. La primera es más frecuente, desarrollándose aproximadamente en un 20% de los pacientes y en algunos casos lleva a la suspensión del tratamiento. Los mecanismos por los cuales se produce la tos no se conocen, pero se piensa que sería relevante la acumulación de BK producida por los IECAs. La BK es un péptido vasodilatador que ejerce sus efectos a través de dos subtipos de receptores (B1 y B2), pertenecientes a la familia de receptores acoplados a proteína G. El receptor B2 se expresa en condiciones fisiológicas y tiene carácter constitutivo, mientras que el receptor B1 se encuentra generalmente ausente en tejidos normales, pero es rápidamente inducido después de algunos tipos de injurias bajo los efectos de citocinas y factores de crecimiento. Se conoce la existencia de dos polimorfismos para el receptor B1 de BK, uno en el exón 3 A1098G y otro en la región promotora G-699C, este último determina un aumento de la actividad promotora para el gen. Un estudio reciente postula que los IECA podrían actuar directamente sobre el receptor B1 de BK debido a la existencia en el segundo loop extracelular de una secuencia específica que determina un dominio de unión a zinc (HEXXH). Este tipo de secuencia está presente en el sitio activo de algunas metalopeptidasas como la ECA y se encuentra altamente conservada en el receptor B1 de distintas especies, pero no está presente en el receptor B2. Además otro estudio focalizado a determinar la participación de ambos receptores en la producción de tos por IECAs demostró que el receptor B1 desempeñaría un papel importante. El objetivo del presente estudio, fue investigar la posible relación entre la manifestación de tos, producida por el consumo de enalapril, y la presencia del polimorfismo G-699C, para lo cual se realizó un estudio de casos y controles donde los casos fueron todos aquellos pacientes que presentaron tos atribuible al uso de enalapril como terapia antihipertensiva, y los controles fueron aquellos pacientes que no presentaron tos por el uso del medicamento. La manifestación de tos se evaluó según los criterios del equipo clínico y se agrupó en grado 1, 2 y 3 de acuerdo a su severidad. La determinación de la presencia del polimorfismo G-699C, se realizó mediante PCR y posterior digestión con enzima de restricción. Se reclutó un total de 263 pacientes con una edad promedio de 63,8 ± 10,4 años, de los cuales 139 fueron casos y 124 fueron controles, además la proporción de mujeres en los casos fue significativamente mayor (p = 0.018). El IMC promedio para el total del grupo correspondió al rango de sobrepeso (28,3 ± 4,7 kg/m2). Los casos presentaron una mayor tendencia a la manifestación de tos en grado 3, donde la proporción de mujeres con este grado fue significativamente mayor (p = 0.041). La dosis de enalapril más frecuentemente usada por los casos fue de 20mg/día y las diferencias encontradas entre el grado de tos y la dosis diaria de enalapril, no fueron estadísticamente significativas (p = 0.346). El genotipo GG represento la mayor proporción para el grupo en estudio (93,5%) y al comparar la muestra estudiada con otras investigaciones, se observó una menor proporción para el genotipo GC. El genotipo CC no fue encontrado en ningún paciente. No se encontró relación entre la presencia del polimorfismo G-699C y la manifestación de tos por enalapril (p = 0.311). En forma paralela a la determinación del polimorfismo, se elaboró, mediante protocolo de inmunización en hembras de conejos New Zealand, anticuerpos anti-BK y anti-ANG, para la determinación plasmática de dichos péptidos y metabolitos asociados en un estudio futuro, obteniéndose títulos adecuados para ambos anticuerpos. Esta investigación contribuyó a descartar la participación del polimorfismo G-699C en la producción de tos por el consumo de enalapril, sugiriendo que todavía falta mucho camino por investigar

Cardiovascular diseases are the primary cause of morbidity and mortality in Chile. According to a study of morbidity perceived of the country, arterial hypertension (HTA) occupies first place in consultation movives at primary level, with a prevalence of a 15%. The inhibitors of the converting enzyme of angiotensin (IECAs), like enalapril, are a drug group widely used for the control of the HTA. In one aspect they prevent the conversion of angiotensin I in the active peptide angiotensin II and by another one they produce accumulation of BK, when preventing its degradation. Like other medicines, the IECAs presents adverse reactions that can limit their use, included these reactions are the cough and angioedema. The former is more frequent, ccurring approximately in a 20% of patients and in some cases leads to the suspension of the treatment. The mechanisms by which the cough takes place are unknown, but it thinks that the accumulation of BK produced by IECAs would be important. BK is a vasodilator peptide to exerts its effects through two subtypes of receptors (B1 and B2), they belong to the family of G protein-coupled receptors. B2 receptor it’s expressed in physiological conditions and has constituent character, while B1 receptor is not in normal tissue generally, but is induced quickly, after some kinds of injuries, under effects of cytokines and growth factors. The existence of two polymorphisms for the B1 receptor of BK are known, one could be found in exón 3 A1098G and the other one in promotional region G-699C, this last one determines an increase of the promotional activity for the gene. A recent study postulates that IECA could act directly on the B1 receptor of BK, because of the existence in the second extracellular loop of a specific zinc-binding sequence (HEXXH). This type of sequence is in the active site of some metalopeptidasas such as ECA, and is conserved highly in the B1 receptor of different species, but is not present in the B2 receptor. Moreover, other research, focused to determinate the participation of both receptors in cough production by IECA’s, shows to B1 receptor would play an important role. The objective of the present research was to investigate the possible relation between the manifestation of cough, produced by the consumption of enalapril, and the presence of G-699c polymorphism. An study of cases and controls was made, and “cases” were all those patients who presented cough attributable to the use of enalapril, like antihypertensive therapy, and the “controls” were those patients who did not present cough by the use of the medicine. The manifestation of cough was evaluated according to the criteria of the clinical equipment and it was grouped in degree 1, 2 and 3, according to his severity. The determination of the presence of the G- 699C polymorphism was made by PCR, and later digestion with restriction enzyme. A total of 263 patients was recruited with an average age of 63,8 ± 10.4 years, 139 were “cases” and 124 were “controls”. Moreover, the women proportion in cases was significantly greater (p = 0,018). IMC average for the total of the group corresponded to the rank of overweight (28,3 ± 4,7 kg/m2). The cases presented a greater tendency to the manifestation of cough in 3º degree, and the proportion of women with this degree was significantly greater (p = 0,041). The dose of enalapril used with more frequency by cases was of 20mg/day and the differences found between the degree of cough and the daily dose of enalapril, were not significant statistically (p = 0,346). GG genotype present the greater proportion for the group in study (93,5%) and when the sample studied was compared with other investigations, was observed a smaller proportion for GC genotype. CC genotype was not found in any patient. Was not relation between the presence of the G-699c polymorphism and the manifestation of cough by enalapril (p = 0,311). Together with determination of the polymorphism, it was elaborated, by means of protocol of immunization in females of rabbits New Zealand, antibodies anti-BK and anti-ANG, for the plasmatic determination of these peptides and metabolites associated in a future study, obtaining titles appropriated for both antibodies. This investigation contributed to discard the participation of the G-699c polymorphism in cough production by the enalapril consumption, suggesting lack much way to investigate