Participación de enzimas aldehído deshidrogenasas en la generación de células dendríticas humanas in vitro

Abstract

Las células dendríticas (DCs) cumplen un rol fundamental en la ejecución y regulación de la respuesta inmune. En los últimos años su producción in vitro se ha convertido en una herramienta de gran utilidad en inmunología. En tanto, los retinoides son moléculas que han mostrado participar en procesos de diferenciación celular en diversos tejidos, siendo producidos por una variedad de células, incluidas las DCs. Se ha descrito que miembros de la familia de las aldehído deshidrogenasas (ALDH), son responsables de catalizar la oxidación irreversible de retinoides tales como el retinal a ácido retinoico. Los objetivos de esta memoria fueron: Estudiar las diferencias de expresión de marcadores de diferenciación en cultivos normales y cultivos mantenidos con el inhibidor dietilaminobenzaldehido (DEAB), específico de ALDHs; evaluar la acción de DEAB en cultivos diferenciados por una vía independiente de la enzima; definir si la adición del inhibidor tiene repercusiones en la viabilidad y funcionalidad normal de las DCs, y evaluar la expresión de mRNA y la actividad enzimática de ALDHs en cultivos normales de diferenciación. Nuestros resultados indican que DCs generadas en presencia de DEAB muestran una expresión significativamente menor del marcador de superficie CD11c, mientras el marcador CD14 se expresa en niveles más elevados que en las DCs generadas en condiciones normales. La adición de DEAB a cultivos independientes de la enzima no tuvo efecto alguno en la diferenciación celular. La cantidad de células muertas para todas las condiciones de experimentación es invariable y funcionalmente las células mantenidas con DEAB presentan características propias de deprivación de retinoides. x También se pudo demostrar diferencias en la expresión de isoenzimas de ALDHs a distintos días de diferenciación, al igual que en los niveles de actividad enzimática. Concluimos que las enzimas retinal deshidrogenasas cumplen un rol muy importante en la generación de células dendríticas humanas in vitro.

Dentritic cells (DCs) fulfill a fundamental role in the execution and regulation of the immune response. In the last years in vitro production has converted in a very useful tool in immunology. While, retinoids are molecules that had showed participation in cellular differentiation processes in diverse tissues, being produced by a variety of cells, included DCs. Reports have described that members of aldehyde dehydrogenase family (ALDH), are responsible for the catalysis of irreversible oxidation of retinoids like retinal to retinoic acid. The objective of this thesis was: To study the expression of differentiation markers in normal cultures and cultures kept with inhibitor diethylaminobenzaldehyde (DEAB), specific for ALDHs; to evaluate the DEAB action in an enzyme-independent differentiated cultures; to define if the addition of the inhibitor has repercussions in the viability and normal functionality of DCs, and to evaluate the expression of mRNA and the ALDH enzymatic activity in normal differentiation cultures. Our results indicate that DC generated in the presence of DEAB show a significantly smaller CD11c surface marker expression, on the other hand CD14 marker is expressed in higher levels than in DCs generated in normal conditions. DEAB addition to enzyme-independent differentiated cultures had no effect in the cellular differentiation. The amount of dead cells, in all experimentation, is invariable and functionally the cells kept with DEAB present own characteristics of retinoid deprivation. We also demostrated differences in ALDH isoenzymes expression at distinct days of differentiation, and also in the levels of enzymatic activity. We conclude that the retinal dehydrogenase enzymes fulfill a very important role in the generation of human dentritics cells in vitro.