Determinación de la sapogenina mayoritaria obtenida de las saponinas de hojas de Ugni molinae, Turcz. (Murtilla) y evaluación de la actividad inhibitoria sobre glicógeno fosforilasa A

Abstract

La murtilla (Ugni molinae), Myrtaceae es un arbusto nativo, de gran importancia debido a la exportación de sus frutos. Diversos estudios han comprobado la actividad analgésica y antiinflamatoria de las hojas de esta planta, siendo la más reciente, que las sapogeninas de esta especie poseen efecto inhibitorio sobre la enzima glicógeno fosforilasa a (GPa).

Esto define los objetivos de este estudio, los cuales son: la obtención de un crudo de saponinas (CS), la determinación de la sapogenina mayoritaria obtenida de la hidrólisis de CS mediante CLAE y la posterior evaluación del efecto inhibitorio sobre GPa de CS y de su hidrolizado (CSH).

Con este fin, se prepararon distintos extractos de hojas de murtilla con solventes de polaridad creciente, siendo uno de ellos el extracto etanólico (EET). El EET fue eluído a través de una columna de poliamida con MeOH, obteniéndose EETlt, el cual se secó para obtener su rendimiento, y luego fue extraído con ayuda de un equipo soxhlet con agua, obteniéndose AET.

El sub-extracto AET fue filtrado, extraído con n-BuOH y rotavaporado, obteniéndose el crudo de saponinas (CS), y comprobándose la presencia de saponinas mediante CCF (utilizando p-anisaldehido como revelador). El CS fue redisuelto en HCl 2 N, y calentado a reflujo por 2 horas, el residuo obtenido fue filtrado y luego secado en estufa a 50° C, llamándose CSH.

Posteriormente, tanto CS como CSH, fueron analizados y comparados mediante CLAE, lo que permitió determinar la sapogenina mayoritaria del hidrolizado, la cual resultó ser el ácido asiático.

El efecto inhibitorio sobre GPa de FS y FSH fue evaluado mediante espectrofotometría, utilizando cafeína como compuesto de referencia. De los resultados se obtuvo que el CS a altas concentraciones presenta un efecto inhibitorio de un 60%, pero para el hidrolizado, el método no fue capaz de determinar la inhibición por la alta absorbancia que presenta la muestra por si sola.

Estos resultados, permitieron contribuir al trabajo realizado en el laboratorio, y al mismo tiempo permiten ampliar el conocimiento químico-farmacológico de esta planta nativa

The murtilla (Ugni molinae), Myrtaceae is a native shrub, with great relevance due to the fruit´s exportation. Several studies have demonstrated the analgesic and anti-inflammatory activity of the leaves, being the most recent, that sapogenins of this species have inhibitory effect against glycogen phosphorylase a enzyme (GPa). This defines the objectives of this study: to obtain a crude saponin fraction (CS), to establish the mayor sapogenin obtained from the hydrolysis process, and to evaluate the inhibitory effect of the CS and the hydrolysis product against GPa. For this purpose, several murtilla leaves extracts were prepared with solvents of increasing polarity, being one of them, the ethanolic extract (EET). The EET was eluted trough a polyamide column with MeOH, yielding EETft, which was dried and then extracted with a Soxhlet with water, obtaining AET. The AET sub-extract was filtered and then extracted with n-BuOH and the solvent was evaporated, obtaining a crude saponin fraction called FS, establishing the saponins presence by TLC (using p-anisaldehyde as developer). The CS was dissolved in HCl 2 N, and heated to reflux for 2 h, the obtained residue was filtrated and then dried in an oven at 50° C, obtaining CSH. Both CS and CHS, were analyzed and compared by HPLC, which permits to determine the mayor sapogenin obtained from the hydrolysis process, which turns out to be the asiatic acid. The inhibitory effect of CS and CHS against GPa was assessed by spectrophotometry, using caffeine as reference compound. From the results, it was determined an inhibitory effect of about 60% for the CS at high concentrations, but the method wasn´t suitable enough to determine the inhibitory effect of CSH, due to the high absorbance this fraction have for itself. This memory, contributes significantly to the expansion of chemical and pharmacological study of this native plant.