Detección y cuantificación de efedrina en orina por HPLC

Abstract

En el ámbito del control de doping es importante poder detectar y cuantificar con un nivel de confianza adecuado los compuestos incluidos en la lista de sustancias prohibidas de la Agencia Mundial Antidopaje (WADA) que tienen definida una concentración de corte. Para la efedrina se ha establecido que una concentración superior a 10 µg/ml en orina se considera con resultado analítico adverso, por lo que es necesario tener una metodología analítica validada para su detección y cuantificación. La efedrina es una amina simpaticomimética, con acción estimulante sobre el sistema nervioso central, el sistema cardiovascular y el sistema respiratorio. Se excreta principalmente en forma inalterada en la orina dentro de las 24 horas siguientes a su administración. Las plantas de la especie Ephedra son la principal fuente natural de efedrina, de éstas la más conocida es el Ma Huang (Ephedra Sinica). A partir de extractos de Ephedra se elaboran suplementos alimenticios que son comercializados principalmente como supresores del apetito y como estimulantes para mejorar el desempeño de los deportistas. En este trabajo se presentan los resultados de la validación de una metodología para la detección y cuantificación de efedrina en la matriz biológica orina por cromatografía líquida de alta eficiencia (HPLC). La metodología analítica desarrollada comprende la utilización de un detector de longitud de onda variable, una columna de fase reversa y como fase móvil una mezcla de tampón fosfato y metanol. Previo al análisis, las muestras son sometidas a una extracción líquido-líquido con solvente orgánico, para obtener un extracto lo suficientemente limpio que pueda ser analizado sin interferencias de la matriz orina. Para la validación de la metodología se realizaron pruebas de especificidad, linealidad, precisión, recuperación de la extracción, límite de detección, límite de cuantificación, estabilidad y la determinación de la incertidumbre de la medición.

Within the doping control area, it is important to be able to detect and quantify the compounds included in the prohibited list of the World Anti-Doping Agency (WADA) that have a defined threshold concentration, with a suitable confidence level. In the case of ephedrine, it has been established that a concentration over 10 μg/ml in the urine is considered adverse analytical findings; therefore it is necessary to have a valid analytical methodology for its detection and quantification. The ephedrine is a sympathomimetic amine, with stimulating action on the nervous central system, the cardiovascular system and the respiratory system. It is excreted mainly in unchanged form in the urine within the 24 hours following its administration. The plants of the Ephedra species are the main natural source of ephedrine; the most well-known of them is the Ma Huang (Ephedra Sinica). Dietary supplements elaborated from extracts of Ephedra are commercialized mainly as appetite suppressors and as stimulants to improve the performance of the athletes. In the present work, the results of the validation of a methodology for the detection and quantification of ephedrine in the biologic matrix urine by high-performance liquid chromatography (HPLC) are presented. The analytical methodology developed includes the use of a variable wavelength detector, a reverse phase column and a mixture of phosphate buffer and methanol as mobile phase. Previous to their analysis, the samples are processed through a liquidliquid extraction with organic solvent to obtain a suitable clean extract that can be analyzed without interferences of the urine matrix. For the validation of the methodology tests of specificity, linearity, precision, recovery of the extraction, detection limit, quantification limit, stability, and the determination of the uncertainty of measurement, were performed.