Desarrollo y validación de una metodología analítica para cuantificar metformina en plasma

Abstract

La finalidad de este trabajo fue desarrollar y validar una metodología analítica simple, selectiva, sensi ble y precisa que fuera capaz de determinar y cuantificar m etformina en fluidos biológicos en este caso plasma , utilizando como técnica la Cromatografía Liquida de Alta Eficiencia, con el fin de ser utilizada en posteriores estudios farmacocinéticos . P ara ello se recurrió en primer término a la revisión de materi al bibliográfico Con los datos obtenidos se realizaron ensayos de manera de deter minar las condiciones cromatográ f i cas más adecuadas y la forma de purificación más eficiente. El método seleccionado consiste en una inyección de una muestra de plasma despu és de una precipitación de proteínas con acetonitrilo. La columna utilizada fue una Water Symmetry C 18 450 x 4,6 mm , la fase móvil consistió en 2,5 m M de dodecilsulfato de Sodio, en una solución formada por 0,1 M fosfato monobásico de potasio (pH 5,3) y ac etonitrilo (73,5:26,5). La velocidad de flujo de la fase móvil fue de 1,0 mL/min y la longitud de onda del detector ultravioleta fue de 225 nm. El método resultó selectivo, preciso y exacto, según los criterios establecidos por la FDA, su límite de cuantificación fue de 4 ng/uL, la recuperación fue mayor a un 80 % para todas las concentraciones control (bajo, media, alta), la curva de calibración es lineal entre los rangos de concentración trabajados (4 – 20 ng/uL) con un coeficiente de correlación mayor a 0,95, las muestras de metformina fueron estables a - 70 °C por tres meses, lo que cumple con lo recomendado por la FDA. En consecuencia, el método es adecuado para su aplicación en estudios farmacocinéticos.

The purpo se of this report was the development of a simple analytical, selective, sensitive and specific analytical methodology that it allows to quantify Metformina in biological fluids (in this case shapes) using as technique the Liquid Chromatographic of high ef ficiency, the objective is it must be use in next pharmacocineticos studies. Therefore bibliographical material was reviewed. With the obtained results, tests were made to determine the most adapted Chromatographic conditions and the form of purification most efficient. The method consists of a direct injection of a plasma sample after a protein precipitation with Acetonitrilo. The used column was Symmetry Column C 18 450 X 4.6, the mobile phase consisted in 2.5 mmol of Sodium Dodecilsulphate , 0.1M monoba sic potassium phosphate (ph 5.3) and Acetonitrilo (73, 5:26, 5). The speed of flow of the mobile phase was 1.0Ml/ min and a wavelength of 225nm of the ultraviolet detector. The method was selective, precise and exact according to the established criterions by FDA, their limit of quantification was 4ng/uL, the recovery was greater to 80% for all the concentrations control (low, average, high), the calibration chart is lineal between the worked concentration ranks (4 20 ng/uL) with a coefficient of correlatio n greater to 0, 95 that it is the recommended coefficient by FDA.