Estudio fitoquímico y farmacológico de Encelia canescens Lam. Asteraceae

Abstract

Encelia canescens Lam., familia Asteraceae de nombre vulgar “coronilla del fraile”, es un arbusto autóctono, que habita desde la I a la IV Región de Chile, zona costera de Perú y norte de Argentina.

Esta especie no tiene estudios farmacológicos, sólo se encuentra literatura de especies que habitan en el Perú. El uso dado por la medicina popular es como galactófora y contra la retención de orina, en cambio otras especies del género son utilizadas como analgésicas para el dolor de muelas, además del uso ornamental, apícola y el llamado corredor biológico.

La recolección fue realizada en julio del 2006 en la III Región en el Valle del Río Huasco. Se procedió a realizar un estudio químico y farmacológico por separado, tanto de la parte aérea seca y molida y de las hojas frescas de la planta.

De la extracción sucesiva con solvente de polaridad creciente de la parte aérea seca y molida de la planta, se obtuvieron los diferentes extractos: hexano (HEX), diclorometano (DCM), acetato de etilo (ACET) y el extracto metanol seriado (MEOH). El extracto resinoso (ERES) fue obtenido extrayendo con diclorometano desde las hojas frescas. El material vegetal sin resina fue extraído de la misma manera anterior, obteniendo los extractos: EHEX, EDCM, EACET y EMEOH. El infuso (INF) fue preparado in situ con 20 g de hojas frescas en 100 mL de agua hirviendo, dejándola enfriar antes de filtrarla.

El aceite esencial (AESC) fue obtenido por hidrodestilación desde el material vegetal seco y molido de la parte aérea y desde las hojas frescas, usando un aparato Clevenger, cubriendo el material con agua destilada e hirviéndolo por más de cuatro horas.

Los extractos metanólicos globales fueron obtenidos desde la planta aérea (EMGpa) y de las hojas frescas (EMGh).

Los principales compuestos presentes en los diferentes extractos fueron separados a través de cromatografías en capa fina, utilizando distintos reactivos reveladores y lámpara UV. Tanto en el material vegetal seco y molido de la partea aérea, como las hojas frescas se encontraron metabolitos mayoritarios como esteroles y/o triterpenos, flavonoides y cumarinas.

El análisis del AESC fue realizado mediante un método por cromatografía de gases y espectrometría de masas, donde fueron identificados 12 compuestos de 16.

El ERES y el AESC fueron fraccionados a través de columnas rápidas de gel de sílice, logrando aislar dos compuestos A y B respectivamente. El compuesto A, obtenido desde el ERES, fue identificado por técnicas espectroscópicas como un derivado cromeno 6,6-(oxidietilidino) bis  7-metoxi-2,2-dimetil-2H-1-benzopirano llamado encecanescina. El compuesto B, aislado desde el AESC, fue identificado por un espectro gas/masa como dimetilencecalina.

La evaluación toxicológica per os del EMGpa ensayado en ratones a la dosis de 2 g/kg, no fue tóxico, ni presentó alteraciones en de los diferentes órganos. La actividad analgésica tópica in vivo del EMGpafrente al ensayo de la formalina en la cola del ratón fue de un 52 %, siendo menor al efecto máximo del fármaco de referencia ibuprofeno (76,5 %). La analgesia per os del EMGpa, mediante el ensayo de las contorsiones abdominales presentó un 40,5 % de efecto, el cual fue menor respecto al fármaco de referencia naproxeno sódico (70 %).

En las evaluaciones farmacológicas in vitro, el EMGpa no presentó actividad atrapadora de radicales libres mediante el ensayo de DPPH. Los ERES, EHEX, EACET de la parte aérea no presentaron actividad antioxidante a través del ensayo de la inhibición de la actividad de la xantino oxidasa.

La actividad antimicrobiana ensayada por la técnica bioensayo bioautografía demostró que los extractos obtenidos desde la parte aérea presentaron actividad frente a las bacterias B. subtilis, S. aureus, M. flavus, K.pneumoniae y E. coli,y no fueron activos frente a los hongos Candida albicans y Saccharomyces cerevisiae.

El ERES y el compuesto A presentaron actividad frente a B. subtilis, S. aureus, K.pneumoniae y E.coli. El compuesto B resultó activo frente a B. subtilis, K.pneumoniae y E.coli.

La concentración mínima inhibitoria (CMI) del compuesto A frente a B. subtilis fue de 240 ug/mL. La CMI de la sustancia B no se determinó, dado que se obtuvo una muestra muy pequeña

Encelia canescens Lam., Asteraceae, known as “coronilla de fraile”, is a native shrub that inhabit from I to IV Region of Chile, coastal zone of Peru and northern Argentina. This species has no pharmacological studies, the literature refers only to species living in Perú. This plant was used by popular medicine as galactophore and against urine retention. In addition other species of the genus are used as analgesic for toothache, besides as ornamentals, and the so-called “biological corridor”. The plant was collected in July 2006 in the III Region of the Huasco River Valley. The chemical and pharmacological studies were carried out separately with the dry aerial part and the fresh leaves of the plant. Successive extraction with solvent of increasing polarity of the aerial part of the plant yielded the different extracts: hexane (EHEX), dichloromethane (EDCM), ethyl acetate (EACET) and serial methanol extract (EMEOH).The resinous extract (ERES) was obtained by dichloromethane extraction from fresh leaves. The vegetal material without resin, was extracted likewise with, obtaining EHEX, EDCM, EACET and EMEOH extracts. The infuse (INF) was prepared in situ from 20 g of fresh leaves in 100mL of boiling water, allowing to cool before filter. The essential oil (AESC ) were obtained by hydrodistillation of vegetal material from the dry aerial plant material and from the fresh leaves using a Clevenger apparatus over a bottom rounded flask, covering the plant material with distilled water and heating over 4 hours. The global methanol extracts were obtained from the aerial plant material (EMGpa) and the fresh leaves (EMGh) The main compounds present in the different extracts were screened through thin layer chromatography using different chromogenic reagents and UV lamp. Triterpenes and /or sterol, flavonoids and coumarins were found as the main metabolites both from the aerial plant material and fresh leaves. The AESC analysis was performed by means of gas chromatography-mass spectra tandem method, 12 compounds of 16 substances found were identified. The ERES and the AESC were fractionated through fast silica gel columns, isolating two compounds named A and B. The compound A, obtained from ERES, was identified by spectroscopic techniques as a cromene derivative 6,6'-(Oxydiethylidine) bis [7-methoxy-2,2- dimethyl-2H- 1-benzopyran], called encecanescin. The compound B, isolated from de AESC, was identified by gas/mass spectra as demethyl encecalin. The toxicological per os evaluation by acute assay in mice showed that EMGpa was no toxic even at a dose of 2 g/kg, neither had toxic effects or the organs showed no alteration o toxic effects. The in vivo topical analgesic activity of EMGpa assayed by the formalin test in mouse tail was about 52% less than the maximum effect of the reference drug ibuprofen (76.5%). The analgesia per os of EMGpa in the writhing test mice was a 40.5%, less than the maximum effect of the reference drug sodium naproxen (70%). In vitro pharmacological evaluations showed that EMGpa had not free radical scavening activity by DPPH test, and the ERES, EHEX, EACET of the aerial part had no antioxidant activity, through xantine oxidase assay. The antimicrobial activity assayed by bioautographic technique showed that the extracts obtained from the aerial part of the plant were active against B. subtilis, S. aureus, M. flavus, K. pneumoniae and E. coli bacteria, and were not active against the fungus Candida albicans and Saccharomyces cerevisiae. The ERES and the compound A, were active against B. subtilis, S. aureus, E. coli and K.pneumoniae, on the other hand, the compound B was active against B. subtilis, E. coli and K. pneumoniae. The minimum inhibitory concentration (MIC) of compound A against B. subtilis was 240 ug/ mL. Substance B MIC was not determinate due to the small amount of isolated sample.