Identificación de la sapogenina principal de una fracción de un crudo de sapogeninas de Quillaja saponaria Mol. : evaluación de su efecto sobre la expresión de COX-2 en células RAW 264.7

Abstract

Esta memoria se desarrolló con el fin de contribuir al conocimiento químico y farmacológico del quillay. El quillay (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae) es un árbol autóctono de Chile que se encuentra mayormente entre la IV y IX región, desarrollándose principalmente en terrenos asoleados. Su corteza, hojas y ramas presentan un alto contenido de saponinas triterpénicas. Estos compuestos tienen la propiedad de tensoactivos, por lo que poseen un amplio uso en la industria cosmética y alimentaria. Se utilizó un extracto comercial rico en saponinas del quillay, el cual se sometió a hidrólisis ácida para obtener el producto de hidrólisis (H-100Q) rico en sapogeninas. Este hidrolizado fue fraccionado mediante sucesivas CC con relleno de sílica gel 60, con la finalidad de separar las sapogeninas por su polaridad. De acuerdo a este procedimiento se formaron 5 grupos denominados Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4 y Pol-5. Se trabajó con la fracción de polaridad media alta Pol4, la cual se sometió a la técnica de separación analítica CLAE asociada a detección UV y IES-EM. Fue analizado tanto el cromatograma obtenido como los espectros de masa, de los cuales se determinó la presencia de ácido quillaico como sapogenina mayoritaria, ácido fitolacagénico y ácido 22-OH quillaico. Para estas tres sapogeninas se propuso una ruta de fragmentación molecular, con el fin de identificar futuros compuestos de núcleos triterpénicos pentacíclicos. Se evaluó el efecto del ácido quillaico sobre la expresión de la COX-2 y la producción de nitrito en el medio de cultivo con la línea celular de macrófago de ratón RAW 264.7. En consecuencia se montó y estandarizó la metodología de cultivo celular, viabilidad celular e inmunowetern blot. Los resultados demuestran que no hay efecto inhibitorio del ácido quillaico sobre la expresión de la COX-2, así mismo para la cuantificación de nitritos en el medio de cultivo, comparado con las células estimuladas con y sin LPS.

This research was developed in order to contribute to the chemical and pharmacological knowledge of the quillaja. The quillaja (Quillaja saponaria Mol., Quillajaceae family) is a tree native to Chile which is mostly found between the IV and IX región, developed mainly in sunny areas. Its bark, leaves and braches have a high content of triterpene saponins. These compounds have the property of surfactants, therefore widely used in the cosmetics and alimentary industry. We used a commercial extract rich in quillaja saponins, which was subjected to acid hydrolysis to obtain hydrolysis product (H-100Q) rich in sapogenins. This hydrolizated was fractionated by successive sílica gel 60 chromatographic columns, with the purpose of separating the sapogenins by polarities. According to this procedure were formed groups called Pol-1, Pol-2, Pol-3, Pol-4 and Pol-5. We worked with the high medium polarity fraction called Pol-4, which was subjected to analytical technique HPLC associated to the UV and ESI-MS. Was analyzed both the cromatogram and mass spectra, which indicated the presence of saponins as mainly quillaic acid, phytolacagenic acid and 22- hydroxy quillaic acid. For these three sapogenins proposed a molecular fragmentation route in order to identify further compounds of pentacyclic triterpene aglycone. We evaluated the effects of the quillaic acid on COX-2 expression and the production of nitric oxide on LPS-induced murine macrophages cell line RAW 264.7, thus we mounted and standardized cell culture, assessment of cell viability and western blot analysis. Quillaic acid did not exhibit inhibitory effect both COX-2 expression and concentration of nitrite in culture supernatants on presence or absence of LPS.