Asociación de mayores niveles de RANKL y linfocitos T CD4+ en periodontitis

Abstract

Propósito: La periodontitis es una enfermedad infecciosa que involucra una sobre-respuesta inmune del hospedero y se caracteriza por la destrucción de los tejidos de soporte del diente.Durante su desarrollo se establece un denso infiltrado celular mononuclear donde el 70% lo constituyen los linfocitos de tipo T, con la capacidad de secretar una serie de citoquinas que participan en los eventos patogénicos de la enfermedad,regulando la inflamación de los tejidos periodontales y la destrucción del hueso alveolar. El objetivo del presente estudio es determinar si en la periodontitis crónica se observan mayores niveles de RANKL y si estos se encuentran asociados a los linfocitos T CD4+ reclutados en los sitios con enfermedad periodontal. Material y Método: En 20 individuos con periodontitis crónica y en 12 individuos controles voluntarios y periodontalmente sanos se determinaron los niveles de mRNA de RANKL mediante RT-PCR tiempo real, se aislaron células gingivales totales para inmunotipificar y cuantificar los leucocitos infiltrantes gingivales y los linfocitos T CD4+ y CD8+ a través de citometría de flujo, en sobrenadantes de cultivos celulares, sin estimular y estimulados con LPS, PHA, extracto bacteriano de e inter-leuquinas 2 y 15, se detectaron los niveles de RANKL mediante ELISA, y se determinó la expresión de RANKL, de células T CD4+ y se colocalizó inmunoreacción positiva para RANKL en linfocitos CD4+ mediante inmunohistoquímica. Resultados Los pacientes con periodontitis mostraron mayores niveles de mRNA de RANKL (Ct y Ct) evaluado mediante RT-PCR (28,791 ± 3,27 vs. 36,514 ± 2,67 y 7,113 ± 3,00 vs. 15,009 ± 2,80,respectivamente) en comparación a individuos periodontalmente sanos, observándose mediante el método 2- Ct que la expresión de RANKL se incrementó en 238,3 (29,8-1903,4) veces con relación a los sujetos controles. Los individuos con periodontitis mostraron mayores niveles (%) de linfocitos totales (58,5 ± 18,45 vs. 41,5 ± 0,89)y de linfocitos T CD4+ y CD8+ (29,1 ± 17,78 vs. 4,6 ± 0,25 y 13,7 ± 7,23 vs. 3,3 ± 0,15, respectivamente,y en cultivos celulares se observaron mayores niveles de RANKL (pg/ml) espontáneos(18,4 ± 5,79 vs. 8,0 ± 1,34) y estimulados con LPS y PHA (33,8 ± 7,30 vs. 21,0 ± 5,60 y 30,1 ± 7,77 vs. 14,5 ± 3,57, respectivamente),en comparación con los individuos periodontalmente sanos.Mediante inmunohistoquímica se observó unamayor inmunoreacción para RANKL y para CD4 en individuos con periodontitis y una clara colocalización de RANKL en linfocitos T CD4+. Conclusión: Estos datos demuestran que mayores niveles de RANKL se encuentran asociados a la periodontitis y que estos mayores niveles se pueden explicar en parte a la actividad de los linfocitos T CD4+ en el sitio de la infección. La determinación de la asociación entre la periodontitis y la síntesis de RANKL constituye un interesante mecanismo molecular que contribuye a explicar en parte la destrucción tisular asociada y permite proyectar posibles nuevas estrategias terapéuticas, mediante la utilización de inhibidores de la actividad de RANKL, tal como osteoprotegerina (OPG), que ayudarían a controlar la pérdida de tejido característica de la enfermedad periodontal.