Estudio de la expresiónn y función de las proteías Wnt3a y CK1 y 2 en el desarrollo embrionario del pez cebra (Danio rerio)

Abstract

La vía de señalización del gen Wnt cumple importantes roles en el desarrollo y oncogénesis, es transducido por al menos dos vías: la vía canónica β-catenina dependiente y la cascada no canónica, independiente de β-catenina. La caseína quinasa CK1 es una familia de proteínas a la que recientemente se le ha relacionado con el desarrollo embrionario. De esta familia se han clonado al menos 7 isoformas, de las cuales CK1α, CK1δ, CK1ε Y CK1γ han sido relacionadas con la vía canónica de Wnt. En esta Memoria de Título se realizaron estudios de expresión y función de CK1γ y wnt3a en el desarrollo embrionario del pez zebra (Danio rerio). Para ello, hemos analizado los patrones de expresión de estos genes mediante hibridación in situ y RT-PCR. Los resultados indican que estos genes se expresan de manera diferencial temporal y espacialmente durante el desarrollo embrionario. CK1γ presenta una expresión ubicua en los primeros estadios. La expresión de wnt3a es evidente desde las 12 horas post fecundación, de forma débil. En estadios más avanzados, ambos genes se expresan fuertemente en la región cefálica y en el primordio de las aletas pectorales. CK1γ además se expresa débilmente en el resto del embrión. Para analizar la función de ambos genes se realizaron estudios de sobreexpresión mediante la inyección del mRNA codificante para CK1γ y wnt3a y ensayos de bloqueo de función para wnt3a mediante la inyección del morfolino oligo antisentido, que silencia específicamente la actividad de este gen. Estos experimentos anteriormente mencionados se realizaron utilizando la técnica de microinyección en embriones en estadio de una célula. Posteriormente los embriones fueron incubados y observados en distintos estadios bajo lupa estereoscópica y clasificados según su fenotipo. Los resultados obtenidos con los experimentos anteriores indican que CK1γ y wnt3a están involucrados en el desarrollo ocular. CK1γ además, en los procesos que regulan la formación del eje dorso-ventral y los movimientos de convergencia y extensión embrionarios en el desarrollo temprano del pez cebra. wnt3a también participa en la formación de estructuras cefálicas y del eje antero-posterior, específicamente en el desarrollo de la cola