Inmunolocalización de sonic hedgehog en el desarrollo embrio-fetal de ratones (mus musculus)

Abstract

Sonic hedgehog (Shh) es un morfógeno esencial para el desarrollo de diversas estructuras, tales como notocorda, placa del piso del tubo neural, miembros, entre otros. Se buscó determinar la inmunolocalización de Shh en embriones y fetos de ratón. Para ello, se eutanasiaron 10 ratones gestantes (Mus musculus) BALB/c, un grupo de 5 animales a los 12,5 días post-coito (dpc), y otro grupo a los 17,5 dpc. Los embriones y fetos obtenidos fueron fijados en formalina al 10 % tamponada en PBS e incluidos en paraplast. Se realizaron cortes transversales seriados. Se utilizó anticuerpo policlonal Shh (Santa Cruz Biotechnology, H-160, conejo), dilución 1:100. Se identificó y describió la inmunolocalización de las muestras marcadas positivamente. La expresión de Shh en los embriones de 12,5 dpc fue inmunopositiva en notocorda, placa del piso del tubo neural, precartílago de radio y ulna, y prácticamente todos los epitelios: bronquial, intestinal, vejiga y uretra. En la etapa fetal, a los 17,5 dpc la inmunopositividad desaparece en el cartílago a excepción de zonas de osificación, disminuye en la epidermis pero aparece en folículos pilosos. La mucosa intestinal se ha diferenciado en segmentos, mostrando una inmunotinción mayor a nivel de las vellosidades intestinales. Shh actúa en distintos estadios del periodo gestacional, siendo clave en la diferenciación de distintas estructuras. En etapas embrionaria, es vital en la formación del sistema nervioso, organogénesis y formación de miembros, por lo que su expresión se encuentra en estas zonas. Sin embargo, en la etapa fetal la expresión cambia a estructuras de mayor especialización como folículo piloso y vellosidades intestinales.

Sonic hedgehog (Shh) is an essential morphogen for the development of various structures, such as notochord, neural tube floor plate, limbs, among others. We sought to determine the immunolocalization of Shh in embryos and mouse fetuses. To do this, 10 pregnant mice (Mus musculus)BALB/c were euthanized, a group of 5 animals at 12.5 days postcoitus (dpc), and another group at 17.5 dpc. Embryos and fetuses obtained were fixed in 10 % formalin buffered in PBS and embedded in paraplast. Serial cross sections were made. Polyclonal antibody Shh (Santa Cruz Biotechnology, H-160, rabbit), dilution 1:100 was used. The immunolocalization of the positively labeled samples was identified and described. Shh expression in 12.5 dpc embryos was immunopositive in notochord, neural tube floor plate, radius precartilage and ulna, and practically all epithelia: bronchial, intestinal, bladder and urethra. In the fetal stage, at 17.5 dpc the immunopositivity disappears in the cartilage except for areas of ossification, decreases in the epidermis but appears in hair follicles. The intestinal mucosa has differentiated into segments, showing greater immunostaining at the level of the intestinal villi. Shh acts in different stages of the gestational period, being key in the differentiation of different structures. In embryonic stages, it is vital in the formation of the nervous system, organogenesis and formation of limbs, so its expression is found in these areas. However, in the fetal stage the expression changes to more specialized structures such as hair follicles and intestinal villi.